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商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

食蟹猴 ADAM8 基因全長ORF克隆

食蟹猴 GPR44 基因全長ORF克隆

食蟹猴 PTGFRN 基因全長ORF克隆

食蟹猴 IL6ST 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CD4 基因全長ORF克隆

食蟹猴 FAS 基因全長ORF克隆

食蟹猴 ART4 基因全長ORF克隆

食蟹猴 ART1 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CD86 基因全長ORF克隆

食蟹猴 NCR1 基因全長ORF克隆

Hela (宮頸癌細胞) 1000U RecJf 核酸外切 RecJ f Exonulease -20℃保存

50次 DNA電泳分子量標準 (300-5000) DNAMETER（2） 4℃保存 0.78-50 ng/ml ELISA Kit for Human Haptoglobin-related protein

明膠生化管  20支/盒葡萄糖肉浸液肉湯    進口、國產Dextrose Meat Infusion Broth用于溶血性鏈球菌的增菌培養(yǎng)（GB標準）250

25mg 核糖核酸 A，牛胰 RNase A,Bovine Pancreas  室溫干燥保存 0.625-40 ng/mL 人吡哆醛/吡哆醇B6(PDXP)ELISA試劑盒

25g 硫柳汞鈉 Merthiolate Sodium 室溫密封避光保存 0.156-10 ng/mL 人核因子κB抑制蛋白α (NF-kappa-B inhibitor alpha)ELISA試劑盒

5g L- 糖 L-(?)-Sorbose  室溫干燥保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Myelin-oligodendrocyte glycoprotein

0.032µg 腸激（輕鏈） Enterokinase，Light Chain -20℃保存LB營養(yǎng)瓊脂進口、國產LB Nutrient Agar250克用于發(fā)酵工程、基因工程和分子生物學中大腸桿菌的培養(yǎng)

1瓶 P3-X63-Ag8.653株 P3-X63-Ag8.653 低溫運輸和保存 15.6-1000 U/L 副溶血性弧菌(VP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

50T 溶血性鏈球菌ACR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Phosphoglycerate kinase 1

120次  抗酒石酸酸性檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存紅葡萄糖肉湯發(fā)酵管進口、國產紅葡萄糖肉湯發(fā)酵管20支BR

10次 標簽蛋白染色試劑盒 Staining Kit for His-Tag -20℃保存 0.156-10 U/mL 人β葡糖苷(β-glucosidase)ELISA試劑盒

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。