操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

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商品屬性：

細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。

二. 細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

狗 c-MET / HGFR 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CD164 / Endolyn 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 EPHA4 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 / 食蟹猴 M-CSF / CSF-1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 IL1R1 / CD121a 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 NXPH1 / Neurexophilin-1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 FAS / TNFRSF6 / CD95 人細胞裂解液 (陽

COV434 (卵巢顆粒腫瘤細胞)5次 TdT加尾法DNA標記試劑盒 TdT-Tailing DNA Labeling Kit Series -20℃保存 0.312-20 ng/mL 人透明質酸2(Hyal-2)ELISA試劑盒

2 ug pCold IV pCold IV 低溫運輸，-20℃保存

丙二酸鹽  20支 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Prostaglandin E synthase 3

2 ug PT2/mCherry PT2/mCherry 低溫運輸，-20℃保存 62.5-4000 nmol/L 羥(Hydroxyproline)ELISA試劑盒

2 ug pcDNA6 pcDNA6 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人N-氨基乙酸轉甲基(Glycine N-methyltransferase)ELISA試劑盒

2 ug pBridge pBridge 低溫運輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒

5ug 6 nt隨機引物 Hexamer -20℃保存YPD瓊脂進口、國產Yeast Extract Peptone Dextrose Agar250克生物制品和蜜漿制劑酵母菌總數測定

雙岐桿菌生化試驗無糖對照  20支賴動力培養(yǎng)基進口、國產LIM Medium250克用于鏈球菌的分離培養(yǎng)；細菌的賴、和動力復合生化試驗

2 ug pBBR1-MCS2 pBBR1-MCS2 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Lysophosphatidic acid receptor 1

1000支 10 μL RNase-free 白吸頭（袋裝長尖）  常溫 0.156-10 ng/mL 人胱天蛋白3(Caspase-3/CPP32)ELISA試劑盒

堿性蛋白胨水 Alkaline Peptone Water 250g