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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

大鼠 TF 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 NET1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 ARFGAP3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 AK1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 THTPA 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 EHD2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 ALDH9A1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 MRPL45 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 ENO1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 PNPLA3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

Eca-109 (食管癌細(xì)胞)2 ug pLVX-aMHC GFP pLVX-aMHC GFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人巖藻糖基轉(zhuǎn)移6(FUT6)ELISA試劑盒

2 ug pCAAGS pCAAGS 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Retinoic acid receptor RXR-beta

2 ug pET-35b(+) pET-35b(+) 低溫運(yùn)輸，-20℃保存大豆胨進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Peptone From Soybean250克BR

5 mg Di-8-ANEPPS Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存

250ML MES Lysis Buffer with Triton   MES Lysis Buffer with Triton   常溫保存 15.6-1000 pg/mL 鵝特定基因序列(Goose)核酸檢測(cè)試劑盒

2 ug pBlueScriptR PEX5L pBlueScriptR PEX5L 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 1.56-100 ng/mL 人血管加壓素V1a受體(V1aR)ELISA試劑盒

100mL PIPES Buffer，0.5M, pH7.0  PIPES Buffer，0.5M, pH7.0  常溫保存

100次 DNA PAGE膠回收試劑盒 PAGE DNABACK 4℃保存 0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Poly [ADP-ribose] polymerase 1

250mL Casein Blocking Buffer in TBS with azide（酪蛋白封堵劑）  Casein Blocking Buffer in TBS with azide 常溫保存

2 ug pCold TF pCold TF 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 46.9-3000 pg/mL 人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)ELISA試劑盒

PALCAM肉湯 PALCAM Broth 250g 1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Androgen-dependent TPF1-regulating protein

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。