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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

大鼠 TIMP1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 TEK / Tie2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 PRLR 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 APCS / SAP 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CXCL5 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 LCN2 / NGAL 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CXCL10 基因全長(zhǎng)ORF克隆

食蟹猴 CD31 / PECAM1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

食蟹猴 FCGRT 基因全長(zhǎng)ORF克隆

食蟹猴 YWHAB 基因全長(zhǎng)ORF克隆

MOLT-4 (急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞) 50T 耐金黃菌PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.625-40 ng/mL 人蛋合(Methionine synthase) ELISA試劑盒

1g 二硫赤蘚醇 DTE 4℃保存大腸桿菌&大腸菌群顯色培養(yǎng)基進(jìn)口、國產(chǎn)E.Coli&Coliform Chromogenic Medium1升同時(shí)檢測(cè)大腸菌群和大腸桿菌，培養(yǎng)24小時(shí)，大腸桿菌顯紫色，大腸菌群顯紅色

EF-18瓊脂 EF-18 Agar 250g 0.312-20 ng/mL 人神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒

1瓶 UT-7株 UT-7 低溫運(yùn)輸和保存 0.156-10 ng/ml ELISA Kit for Human Alpha-2-macroglobulin

5次 包涵體中量純化試劑盒 Inclusion Body Midiprep Kit 常溫保存（和核酸清除劑需要-20℃保存，包涵體溶解液室溫保存） 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Secreted frizzled-related protein 4

125ML MES Lysis Buffer with Triton,2X  MES Lysis Buffer with Triton,2X  常溫保存

HB四連式牛津杯  10個(gè)*15包/箱 0.125-8 ng/mL 人熱休克蛋白47(HSP47)ELISA試劑盒

2 ug pSIREN-RetroQ-DsRed-Express pSIREN-RetroQ-DsRed-Express 低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人熱休克蛋白β6(HSPβ6)ELISA試劑盒

100mL RNase-free 異硫酸胍溶液,5M  常溫 0.156-10 ng/mL 人基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)ELISA試劑盒

四硫磺酸鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)（TTB）顆粒 Tetrathionate Broth Base 300ml/袋*10Campy-Cefex添加劑進(jìn)口、國產(chǎn)Campy-Cefex Supplement2毫升×10支添加于200ml CAMPY-CEFEX瓊脂基礎(chǔ)中

50T 人皰疹病毒6型PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人干因子/肥大生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。