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實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

小鼠 Smad1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽

小鼠 MAPK14 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

小鼠 Smad5 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽

小鼠 CD54 / ICAM1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

小鼠 VEGF-C 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

小鼠 ALK-2 / ACVR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶HA標(biāo)簽

人 GLP1R 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 Spp1 轉(zhuǎn)錄變體1

UMNSAH/DF-1 (雞胚成纖維細(xì)胞)50T 乳酸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Kin of IRRE-like protein 1

1個(gè) 冰袋   1.56-100 ng/mL ELISA Kit for Human Cytochrome P450 1A1

50T 梅迪一維斯納病毒PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 6.25-400 pg/mL ELISA Kit for Human Protein unc-13 homolog C

MI瓊脂培養(yǎng)基平板  9cm*10個(gè) 0.156-10 ng/mL 人內(nèi)皮特異性分子1（ESM-1）ELISA試劑盒

1mg 重組蛋白G Recombinant Protein G -20℃保存 0.312-20 ng/mL 人線粒體CDP-甘油二酯-甘油-3-3磷酯酰轉(zhuǎn)移(PGP synthase 1)ELISA試劑盒

1mL 博萊溶液,10mg/mL Bleomycin Solution -20℃避光保存假單胞P瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Pseudomonas Agar P250克銅綠（綠膿）假單胞菌色素生成試驗(yàn)

250U 無(wú)機(jī)焦，熱穩(wěn)定 Inorganic Pyrophosphatase，Thermostable -20℃保存

1瓶 293E株 293E 低溫運(yùn)輸和保存酪胨進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Casitone250克BR

100μL Camptothecin（ ） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Aquaporin-1

20次 一站式His標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝(超聲破碎) One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack 介質(zhì)請(qǐng)于20%乙醇中4℃保存，PMSF于-20℃保存，其余試劑4℃放置

50T 人亞甲基四氫還原基因C677T突變PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人抗原KI-67(Antigen KI-67)ELISA試劑盒

培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。