T4 DNA 連接酶

商品屬性：

商品介紹：

描述：T4 DNA Ligase 可催化相鄰 DNA 鏈的 5’-P 末端和 3’-OH 末端以磷酸二酯鍵結(jié)合的反應(yīng)，需 ATP 作輔酶，不僅 可以催化粘性末端之間或平滑末端之間的 DNA 的連接，也 可以催化 DNA 與 RNA 之間以及少數(shù) RNA 之間的連接?？?應(yīng)用于在粘性末端或平末端連接雙鏈 DNA 分子，也可應(yīng)用 于修補雙鏈 DNA、RNA 或 DNA RNA 雜交體上的缺口。

組分

儲存：-20°C 可保存 2 年。
活性定義：16°C 反應(yīng) 30 分鐘條件下，使 1pmol 的粘性末端
DNA 連接所需要的酶量定義為 1Unit。
失活：65°C，10 分鐘。
10×T4 Ligase Buffer：500 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mMMgCl2, 25mM DTT, 5mM ATP.
操作方法
1. 按以下組分配制反應(yīng)體系
10×T4 Ligase Buffer 2 μl
載體 50 ng(0.2-1pmol)
插入片段 1-50 ng(0.2-10pmol)
T4 DNA Ligase(200 U/μl) 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意：兩個片段的連接時，通常載體與插入片段的摩爾比為1:3（但該比例并非絕對嚴謹，在 1:1-1：10 范圍內(nèi)均可獲得理想的實驗結(jié)果），提取根據(jù)片段大小與濃度，計算其摩爾濃度。
2. 如為粘末端連接反應(yīng)， 22°C （16-37°C）連接 30min，連接產(chǎn)物直接用于轉(zhuǎn)化（或凍存于-20°C）。

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