操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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商品屬性：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠 MGST1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CPA2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 POLR2E 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 GSTM1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CTHRC1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 MGST3 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 PRDX2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 ECH1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 RPL15 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 GSTM7 基因全長(zhǎng)ORF克隆

CoC1 (卵巢癌細(xì)胞) 25次 miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒 miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit -20℃保存 12.5-800 U/mL ELISA Kit for Human NKG2D ligand 2

500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH7.6   Phosphate Buffer，0.2M, pH7.6   常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Kallikrein-1

馬尿酸鈉（軍團(tuán)菌）  20支/盒PEA瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)PEA Agar250克從含革蘭氏陰性菌的標(biāo)本中分離培養(yǎng)革蘭氏陽(yáng)性菌

1mL Protein A磁珠   0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Cytidine deaminase

500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH7.2   Phosphate Buffer，0.2M, pH7.2   常溫保存 15.6-1000 pg/mL 人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA試劑盒

250mL Tissue Embedding Reagent  Tissue Embedding Reagent  常溫保存 0.156-10 ng/mL 人核受體輔激活蛋白1(NCOA1/SRC-1/KAT13A)ELISA試劑盒

50次 柱式土壤DNAout Column Soil DNAOUT 常溫

麥康凱肉湯 MaConkey Broth 250g 0.078-5 ng/mL ELISA Kit for Human Kynurenine/alpha-aminoadipate aminotransferase, mitochondrial

1張 硝酸纖維素膜，13×20 cm (Amersham) Nitrocellulose Membrane 常溫保存 0.312-20 ng/mL 人纖維連接蛋白Ⅲ型域包含蛋白5(FNDC5)ELISA試劑盒

1g 離析 R-10 Macerozyme R-10  4℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Fibroblast growth factor 21

50T 副溶血性弧菌PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存 3.12-200 ng/mL 人血管性血友病因子/瑞斯托輔因子(VWF)ELISA試劑盒