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PCDH1elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度

時(shí)間:2018/5/25閱讀:207
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PCDH1elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度
此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型,ELISA檢測(cè)試劑盒出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此,可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng),顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。如果您一直被所困擾,那么也許您該花些時(shí)間來(lái)優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間,但也是值得的。目前主要有兩種類(lèi)型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面ELISA檢測(cè)試劑盒、吸附的抗原、您的抗體和檢測(cè)試劑。
實(shí)驗(yàn)條件的選擇
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:elisa試劑盒用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份)。elisa試劑盒然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿(mǎn)意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,elisa試劑盒尤其是H2O2在臨用前加入。
PCDH1elisa試劑盒端錨聚合酶1(TNKS1)ELISA試劑盒 ,英文名: TNKS1 ELISA Kit

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