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熒光定量PCR擴增曲線四個時期

時間:2023/8/7閱讀:1048
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   擴增曲線是描述PCR動態(tài)進程的曲線,以循環(huán)數(shù)為橫坐標,以反應過程中實時熒光信號強度為縱坐標。

理論上PCR過程中反應產物是以指數(shù)增長的,但隨著PCR循環(huán)數(shù)的增加,DNA聚合酶失活、dNTP和引物枯竭、反應副產物阻礙反應等原因,致使PCR的擴增效率降低,產物生成的速度逐漸減緩,因此擴增曲線是一條“S形"曲線。

擴增曲線可以分成四個時期:基線期,指數(shù)期,線性期,平臺期。

基線期:擴增曲線的水平部分,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物生成量的變化。

指數(shù)期:PCR指數(shù)擴增期,擴增曲線起峰,每個循環(huán)的產物量與初始模板量符合指數(shù)關系,PCR產物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關系。

線性期:PCR反應后期,由于PCR反應體系各成分的消耗、產物抑制等因素的影響,反應效率降低,產物量與初始模板量不再符合指數(shù)關系。

平臺期:PCR反應停止,PCR產物不再隨循環(huán)數(shù)增加而增加。由于影響PCR擴增的因素錯綜復雜,每個反應進入平臺期的時間和平臺期的高低都各不相同。





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