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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核酸定性檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P10649
產(chǎn)品分類:RT-PCR法
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點:
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
球形節(jié)桿菌培養(yǎng)基: CM0050異Vc 鈉菌。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法;定期移植法
桔青霉(斜面)生長條件: 25,好氧培養(yǎng)基: Czapek's 瓊脂:蔗糖 30.0 g,NaNO3 3.0 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,KCl 0.5 g,FeSO4·4H2O 0.01 g,K2HPO4 1.0 g,瓊脂 15.0 g,蒸餾水 1.0 L,pH 6.0-6.5 。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
-971℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
HBUM171278模式菌株: no安全等級: 1種屬: Amycolatopsis│coloradensis土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃
小珊瑚球菌粘細菌分類及藥物篩選模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 844生長條件: 30℃
黃色赤桿菌南大西洋細菌模式菌株: no水樣/深海海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 25℃
枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基: CM0002產(chǎn)肌苷。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法;定期移植法
艾霍湖涅斯捷連科氏菌海洋放線菌模式菌株: no沉積物/重力柱(地質(zhì))表層樣品提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃
北京棒桿菌培養(yǎng)基: CM0050糖蜜原料L-賴氨。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 定期移植法;其他
-972℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
鏈霉菌培養(yǎng)基: 0012模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
內(nèi)酰胺諾卡氏菌產(chǎn)生頭霉素C模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 28C
CGMCC1.350培養(yǎng)基: 266模式菌株: no種屬: Bacillus│cereus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法
白地霉培養(yǎng)基: 0013飼料酵母提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
溜曲霉釀造醬油。模式菌株: no麩曲提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃
地芽孢桿菌培養(yǎng)基: 859模式菌株: no硫磺提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 70℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
1-己基-2,3-二甲基溴化咪唑
2-基-4-三
4-基-3-甲
3,5-二-4-
4-Hydrazinobenzoic acid hydrochloride 4-羧基鹽鹽 24589-77-3
gluconate 葡萄糖 3632-91-5
TRI- DICITRATE NONAHYDRATE 檸檬 153531-96-5
sulfate 無水 7487-88-9
大鼠中性粒明膠酶關(guān)聯(lián)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 ,英文名: NGAL ELISA Kit
Mouse soluble cell differeiation aigen 40 Ligand (sCD40L) ELISA Kit 小鼠可溶性白分化抗原40配體(sCD40L)ELISA試劑盒
MouseFactor-relatedApoptosisligand,FASLELISAKit 小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanHypotheticalproteinLOC677168ELISAKit人假定蛋白LOC677168規(guī)格:48T/96T
維生素B12比色法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitHpt/HP大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白規(guī)格:48T/96T
豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核酸定性檢測試劑盒扁蓄苷572-30-5中文別名:扁蓄甙
英文名:Avicularin
英文別名:3-(α-L-Arabinofuranosyloxy)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-4H-1-benzopyran-4-one
登錄號:572-30-5
分子式:C20H18O11
分子量:434.35
分子結(jié)構(gòu):
外觀:黃色晶體
規(guī)格:20 mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:蓼科植物篇蓄(Polygonum aviculare L.)的全草
溶解性:可溶于DMSO、熱,不溶于等溶劑。
熔點:217℃
旋光度:-241°()
藥理藥效:利尿、利膽。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
PCR的反應(yīng)條件:
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。
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