JAK2和STAT3抑制劑(WP1066)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10572

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：JAK2和STAT3抑制劑(WP1066)

英文名稱：WP1066

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10572

產(chǎn)品介紹:

WP1066是一種新穎的JAK2和STAT3抑制劑，對STAT5和ERK1/2也起作用，但對JAK1和JAK3沒有影響。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：857064-38-1

純度：99.67%

分子量：356.22

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大腸桿菌炎癥負調(diào)控因子蛋白抗體Anti-NRG1 Antibody密封蛋白(OCLN)

黑曲霉8-羥基脫氧鳥抗體Anti-NRG2 Antibody糜蛋白原B2(CTRB2)

農(nóng)壤霉菌抗體Anti-NRIP1 Antibody糜蛋白原B1(CTRB1)

深藍紫色桿菌蛋白抑制劑14抗體Anti-NRP2 Antibody鎂離子轉(zhuǎn)運蛋白1(MAGT1)

耐熱鹽土生古菌2型豬鏈球菌菌體蛋白抗體Anti-NRP1 Antibody(PB0320)原粒蛋白16同源物B(ZG16B)

黑線信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體Anti-NRXN1 Antibody錨定蛋白重復(fù)域蛋白1(ANKRD1)

耐久腸球菌磷化蛋白酪磷2抗體Anti-NRXN1 Antibody毛狀樣蛋白1(COTL1)

粉粒紅濕傘磷化蛋白酪磷2抗體Anti-NSF Antibody毛細血管擴張性共濟失調(diào)突變因子(ATM)

*蛹蟲草（北冬蟲夏草、北蟲草）染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白1抗體Anti-NRXN1 Antibody毛透明蛋白(TCHH)

頂孢頭孢霉磷化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)１抗體Anti-NT-3(Neurotrophin-3) Antibody貓眼綜合征染色體區(qū)候選基因1(CECR1)

皺紋單胞菌促黃體激誘導(dǎo)蛋白抗體Anti-NT-4/NTF4 Antibody脈周蛋白1(PPHLN1)

北土地桿菌絲/蘇激36融合同源蛋白抗體Anti-NTF3 Antibody麥芽糖糖化(MGA)

枯草芽孢桿菌S100P結(jié)合蛋白抗體Anti-NTN1 Antibody離子通道輔助蛋白1(CLCA1)

隔離土地桿菌SAMD14抗體Anti-NTRK1 Antibody化物內(nèi)通道蛋白1(CLIC1)

炭疽芽胞桿菌分泌模塊化鈣結(jié)合蛋白2抗體（平滑肌相關(guān)蛋白2）Anti-NTN1 Antibody絡(luò)絲蛋白(RL)

細鏈格孢鈉單獨轉(zhuǎn)運蛋白SLC26A4抗體Anti-NTRK1 Antibody卵質(zhì)2(OVCH2)

類粘蛋白2抗體Sphingomonasyantingensis人子宮成纖維細胞提取物

骨硬化病相關(guān)跨膜蛋白1抗體Aeromonasaquariorum人卵巢上皮細胞提取物

富含脯突觸相關(guān)蛋白SHANK3抗體球形賴芽孢桿菌人睪丸支持細胞提取物

癌調(diào)蛋白/癌鈣蛋白抗體產(chǎn)金黃桿菌人子宮平滑肌細胞提取物
JAK2和STAT3抑制劑(WP1066)弗雷曲霉 2,6-二甲氧基AKT蛋白

果生鏈核盤 4-芐氧基苯β-胡蘿卜

葡萄座腔 N-Fluorenemethoxycarbonyl-L-Allyl Glycine番茄紅

釀酒酵母 2-甲氧基-5-(三氟甲基)苯甲維生A

哈茨木霉雙(二苯基磷)乙烷化鑷禽腺病4型

產(chǎn)克雷伯氏 4,4-(1,4-亞苯基)雙(2,2:6,2-四吡啶)B瘤因子6

玉黑粉 2,5-二(甲基)-1-甲氧基-4-(2-乙基己氧基)苯多巴

突孢毛殼 N4-乙酰胞嘧啶卵黃蛋白原2

多粘類芽胞桿 2-芐氧基溴乙烷白血病病P27抗體

釀酒酵母 (R)-芐氧甲基環(huán)氧乙烷X-框結(jié)合蛋白1

枯草芽孢桿 3,5-二芐氧基苯甲血管緊張轉(zhuǎn)化

阪崎腸桿 2-氟-5-苯甲球蛋白重鏈可變區(qū)

*芽胞桿（Bacillus atrophaeus）ATCC 9372；（曾用名：枯草芽胞桿黑色變種） TCPP[=四(4-羧苯基)卟吩][銅和鎘用超高靈敏分光光度試劑][用于和高效液相色譜同時測定金屬]粘蛋白5AC

核盤 2-氟-6-甲氧基苯甲巰基氧化

琉球曲霉 2-氟-4-三氟氨基肽
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)