MNK1和MNK2抑制劑(eFT508)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10529

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：eFT508

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

eFT508是一種高效，高選擇性，可MNK1和MNK2抑制劑，其IC50值均為1-2nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1849590-01-7

純度：99.49%

分子式：C??H??N?O?

分子量：340.38

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱：MNK1和MNK2抑制劑(eFT508)

英文名稱：eFT508

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10529

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種環(huán)指蛋白22抗體Anti-IRF8 Antibody絲裂原激活蛋白激8(MAPK8)

大腸埃希氏菌糖原生成相互作用蛋白抗體Anti-IRF4 Antibody(PB0220)絲裂原激活蛋白激7(MAPK7)

紫蓋蜜環(huán)菌環(huán)指蛋白89Anti-IRF5 Antibody(PB0689)絲裂原激活蛋白激14(MAPK14)

地衣芽孢桿菌谷酰轉(zhuǎn)2抗體Anti-IRF9 Antibody絲裂原激活蛋白激11(MAPK11)

帶化紅球菌T淋巴膜蛋白4抗體Anti-IRS1 Antibody絲聚蛋白2(FLG2)

球孢白僵菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ISG15 Antibody絲聚蛋白(FLG)

黃色籃狀菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-IRS1 Antibody絲甘蛋白聚糖(SRGN)

交角耳磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-IRS2 Antibody絲蛋白Cγ(FLNC)

木耳脫氫膽固還原14抗體Anti-ISG15 Antibody絲蛋白Bβ(FLNβ)

葉點(diǎn)霉菌甲狀腺結(jié)合球蛋白抗體Anti-ISL1 Antibody絲組合因子5(SERINC5)

玫煙色棒束孢轉(zhuǎn)導(dǎo)β1X連鎖蛋白抗體Anti-ITGA1 Antibody絲組合因子4(SERINC4)

枯草芽孢桿菌內(nèi)皮B受體抗體Anti-ITCH Antibody絲組合因子3(SERINC3)

樟疫霉轉(zhuǎn)導(dǎo)β1X連鎖受體蛋白1抗體Anti-ITCH/AIP4 Antibody絲組合因子2(SERINC2)

平菇甲狀腺受體相關(guān)蛋白220抗體Anti-ITGA1 Antibody絲組合因子1(SERINC1)

熒光假單胞菌磷化甲狀腺受體相關(guān)蛋白220抗體Anti-ITGA2B Antibody絲棕櫚酰轉(zhuǎn)移長鏈堿性亞基3(SPTLC3)

鹽水海桿狀菌抑癌基因5抗體Anti-ITGA1 Antibody絲消旋(SRR)

溶質(zhì)載體家族39成員11抗體鼠乳桿菌小鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞

SAMD9蛋白抗體致病性大腸埃希氏菌小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞

染色質(zhì)組裝因子1P155抗體假單胞桿菌小鼠角膜上皮細(xì)胞

SARM1蛋白抗體雪腐鐮刀菌（斜面）小鼠角膜成纖維細(xì)胞
MNK1和MNK2抑制劑(eFT508)魯氏毛霉異基 β-D-硫代吡喃葡萄糖半胱蛋白12

淺黃色假單胞 N-乙酰-D-谷半胱蛋白3

絲球毛霉 2-甲基-3-乙半胱蛋白8

pOJ260 苯并［g,h,i］芘半胱蛋白9

藍(lán)微褐鏈霉 Pramipexole 2HCl Monohydrate表皮生長因子

灰黃青霉 2-氨基苯頻哪酯二

費(fèi)氏中華根瘤 3-喹啉二酰

高山被孢霉 4-氟-2-甲氧基苯甲補(bǔ)體蛋白3

曲霉 1-Cbz-4-酮補(bǔ)體蛋白4

釀酒酵母叔丁鋰超氧化物歧化

聚生殼 2-芐氧基苯傳染性法氏囊病病抗體

新城疫病 2,6-二氟雌二

細(xì)鏈格孢 2,6-二氟芐基雌

pME6032 4-溴-3-甲氧基苯促卵泡

死亡谷芽孢桿 4,4-二三聯(lián)苯促腎上腺皮質(zhì)

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