當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細(xì)胞系>>大鼠細(xì)胞系>> RIN-m5f大鼠β胰島素瘤細(xì)胞
貨號 | A01X1146 | 規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
產(chǎn)品名稱 | RIN-m5f大鼠β胰島素瘤細(xì)胞 | 貨號 | A01X1146 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | RINm5f:RIN-m5f |
分類 | 大鼠系 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
商品介紹:
別稱 | RIN m5F |
組織來源 | 胰腺/朗格漢斯胰島 |
生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
RIN-m5F細(xì)胞是大鼠胰島細(xì)胞RIN-m的克隆,分泌胰島素及L型多巴脫羧酶;RIN-m5F細(xì)胞不產(chǎn)生生長激素抑制激素。 | |
生物安全等級 | 1 |
詳情簡介 | RPMI-1640+10% FBS+1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | |
凍存液 | 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO |
溫度 | 液氮 |
培養(yǎng)條件 | |
氣相 | 空氣,95%;CO2,5% |
溫度 | 37℃ |
基因表達(dá)情況 insulin; L-dopa-decarboxylase | insulin; L-dopa-decarboxylase |
保藏機構(gòu) | ATCC; CRL-11605 |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項:
(1) 細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時候,這時細(xì)胞生長狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時方法和平時一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說,每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個小時,再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因為這樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。
公司正在出售的產(chǎn)品:
CD85h抗體磷酸化白細(xì)胞介素-10受體a抗體 英文名;phospho-IL10RA (Ser319 + Ser323)
CD86抗體磷酸化白細(xì)胞介素13受體α1抗體 英文名;phospho-IL13RA1 (Tyr405)
CD8β鏈(CD8-β)抗體磷酸化白細(xì)胞介素1受體銜接蛋白抗體 英文名;phospho-TIRAP (Tyr86)
CD8抗體磷酸化白細(xì)胞介素3受體β抗體 英文名;phospho-IL3RB (Tyr593)
CD8重組兔單克隆抗體磷酸化白細(xì)胞介素-7受體a(CD127)抗體 英文名;phospho-IL7R (Tyr449)
RIN-m5f大鼠β胰島素瘤細(xì)胞CD90抗體磷酸化斑聯(lián)蛋白抗體 英文名;Phospho-Zyxin (Ser142+Ser143)
CD90重組兔單克隆抗體磷酸化半胱胺酸蛋白酶蛋白6抗體 英文名;phospho-Caspase 6 (Ser257)
CD93抗體磷酸化胞漿型磷脂酶A2抗體 英文名;phospho-CPLA2 (Ser505)
CD97抗體磷酸化胞吞再循環(huán)相關(guān)銜接蛋白CENTB1抗體 英文名;phospho-CENTB1 (Ser554)
CD98輕鏈抗體磷酸化表皮生長因子受體抗體 英文名;Phospho-EGFR (Ser991)
CD98重鏈抗原抗體磷酸化表皮生長因子受體重組兔單克隆抗體 英文名;phospho-EGFR (Ser695)
CD99抗體磷酸化丙酮酸激酶M2抗體 英文名;Phospho-PKM2 (Tyr105)
CD99樣蛋白2抗體磷酸化丙酮酸脫氫酶α1抗體 英文名;phospho-PDHA1 (Ser293)
CD9蛋白抗體磷酸化波形蛋白抗體 英文名;phospho-Vimentin (Ser55)
CD9重組兔單克隆抗體磷酸化補體成分5受體1抗體 英文名;phospho-C5R1 (Ser338)
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時,吸除無血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長滿之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗證敲減/過表達(dá)效率。
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