細胞凍存注意事項：
(1)  細胞的收獲
用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿 90% 的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數(shù)量也多，并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細胞再重懸，活細胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細胞保存的最終細胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2)  保護劑的使用
細胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細胞的培養(yǎng)液混合。
(3)  細胞凍存的速率
細胞的冷凍速率最適控制在讓細胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細胞損害。對大多數(shù)細胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4)  儲存環(huán)境
細胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。

操作步驟:

(1) 細胞系培養(yǎng)：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)

A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。

B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。

分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。

(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。

(4) 轉(zhuǎn)染準備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。

(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CDC42結(jié)合蛋白激酶α/MRCKα抗體磷酸化叉頭蛋白3A抗體　英文名；Phospho-FoxO3a (Ser318 + Ser321)

CDC42效應(yīng)蛋白3抗體磷酸化叉頭蛋白3A重組兔單克隆抗體　英文名；Phospho-FoxO3a (Ser253)

CDK2相互作用蛋白抗體磷酸化叉頭蛋白4抗體　英文名；phospho-FOXO4 (Ser262)

CDK5和ABL1酶底物1抗體磷酸化叉頭蛋白O6抗體　英文名；phospho-FOXO6 (Ser184)

CDK5激活結(jié)合蛋白1抗體磷酸化叉頭蛋白家族1(Ser319)抗體　英文名；Phospho-FoxO1 (Ser319)

CELF3蛋白抗體磷酸化叉頭蛋白家族1抗體　英文名；Phospho-FoxO1 (Ser256)

CENPBD1蛋白抗體磷酸化叉頭蛋白家族抗體　英文名；Phospho-FOXO1 + FOXO3 + FOXO4 (phospho T24 + T32)

CENTA2蛋白抗體磷酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體　英文名；phospho-KLF5 (Ser311)

Centaurin α1抗體磷酸化沉默調(diào)節(jié)蛋白1抗體　英文名；Phospho-SIRT1 (Ser47)

H22小鼠肝癌細胞CENTB2蛋白抗體磷酸化沉默調(diào)節(jié)蛋白1重組兔單克隆抗體　英文名；Phospho-SIRT1 (Ser47)

CENTD1蛋白抗體磷酸化沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白6抗體　英文名；phospho-SIRT6 (Ser338)

CENTG3蛋白抗體磷酸化成骨特異性轉(zhuǎn)錄因子抗體　英文名；phospho-RUNX2 (Ser451)

CERD4蛋白抗體磷酸化成視網(wǎng)膜細胞瘤抑癌蛋白抗體　英文名；phospho-Rb (Ser780)

cereblon蛋白抗體磷酸化成纖維細胞生長因子受體3抗體　英文名；phospho-FGFR3 (Tyr724)