Akt廣譜抑制劑(Afuresertib)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10533

中文名稱：Akt廣譜抑制劑(Afuresertib)

英文名稱：Afuresertib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10533

產(chǎn)品介紹:

Afuresertib是一種有效的ATP競爭性的Akt廣譜抑制劑，作用于AKT1，AKT2和AKT3，Ki分別為0.08，2和2.6nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1047644-62-1

別名：GSK2110183

純度：98.91%

分子量：427.32

儲存條件：-20℃避光保存于氮氣中。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

紅曲霉特異蛋白抗體Anti-KCNA2 Antibody雙特異性磷1(DUSP1)

反卷毛殼THAP2蛋白抗體Anti-KCNA1 Antibody雙特異性酪磷化調(diào)節(jié)激1A(DYRK1A)

云芝栓孔菌瞬時受體電位離子通道蛋白5抗體（M亞家族）Anti-KCNA1 Antibody雙糖鏈蛋白聚糖(BGN)

黑木耳云章氏酵母瞬時受體電位離子通道蛋白4抗體（M亞家族）Anti-KCNA3 Antibody雙腎上腺皮質(zhì)激樣激1(DCLK1)

芽胞桿菌屬形成相關(guān)凋亡蛋白2抗體Anti-KCNA4 Antibody雙腎上腺皮質(zhì)激(DCX)

鞘桿菌轉(zhuǎn)運蛋白1抗體Anti-KCNA5 Antibody雙解絲蛋白2(TWF2)

瘤突曲霉核凋亡因子THAP1抗體Anti-KCNA5 Antibody雙解絲蛋白1(TWF1)

卷枝毛霉顆粒相關(guān)蛋白TIA-1抗體Anti-KCNB1 Antibody(PB0149)衰老關(guān)鍵蛋白5(FBLN5)

糞腸球菌胸腺核蛋白1抗體Anti-KCNA6 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白4(FBLN4)

褐囊蜜環(huán)菌腫瘤壞死因子α誘導相互作用蛋白3抗體Anti-KCND1 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白3(FBLN3)

蘇云金芽孢桿菌景洪亞種辣椒受體3抗體Anti-KCNH1 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白2(FBLN2)

蛹蟲草（北冬蟲夏草，北蟲草）TEX261蛋白抗體Anti-KCND2 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白1(FBLN1)

亞褐鈸孔菌促甲狀腺受體抗體Anti-KCND3 Antibody衰變加速因子(DAF)

三線鐮孢磷化酪激A抗體Anti-KCNH1 Antibody輸入蛋白9(IPO9)

阿姆斯特丹曲霉Toll樣受體3抗體Anti-KCNIP2 Antibody輸入蛋白8(IPO8)

RP4質(zhì)粒T受體γ抗體Anti-KCNH2 Antibody輸入蛋白7(IPO7)

突觸結(jié)合蛋白12抗體腸炎沙門氏菌亞種大鼠成骨細胞

突觸結(jié)合蛋白10抗體葡萄汁有孢漢遜酵母大鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞

14-3-3蛋白抗體高地芽胞桿菌大鼠滑膜細胞

角質(zhì)蛋白α抗體大腸埃希氏菌(凍干粉)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞
Akt廣譜抑制劑(Afuresertib)盤長孢狀盤孢 1-芐基-3-氨基吡咯烷球蛋白E

雞腿菇2 3-氨基-1-Boc-球蛋白G

鏈格孢 (1S,2S,5S)-(-)-2-羥基-3-蒎酮球蛋白G1

淡青鏈霉三（4-氟苯基）膦球蛋白G2

陰溝腸桿 4-氨基-2-球蛋白M

蘇云金芽孢桿 2-羥基-4-正辛氧基二苯甲酮腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子

巨獸芽孢桿腺-5'-磷牛血清白蛋白

白布勒酵母 4-(芐氧基羰基)苯皮質(zhì)

多粘類芽孢桿 2-腺皮質(zhì)酮;腎上腺酮

新疆鹽地桿屬乙基六氟戊二?；吇蜃优潴w2

葡萄球 5-溴-2-熱休克蛋白60

假單胞屬 2--5-熱休克蛋白-70

弗雷克氏志賀氏 N-Boc-4-氨基-4-羧熱休克蛋白90

球毛殼 N-叔丁氧羰基4-(FMOC-氨基)-4-羧溶

圍小叢殼 α-代肉桂溶

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