磷酸酶抑制劑(PP1活性抑制劑)(Salubrinal)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10465

中文名稱(chēng)：磷酸酶抑制劑(PP1活性抑制劑)(Salubrinal)

英文名稱(chēng)：Salubrinal

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10465

產(chǎn)品介紹:

英文名稱(chēng)：Salubrinal

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

Salubrinal是一種磷酸酶(PP1)抑制劑，作用于真核生物翻譯起始因子2亞基(eIF2α)，抑制PP1活性，IC50?為1.7μM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：405060-95-9

純度：99.58%

分子量：479.81

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

Hyphomonas adhaerensRAM-11抗體Anti-CYP1A2 Antibody(PB0574)整合α8(ITGα8)

草本枝孢霉抑癌基因Rbms3抗體Anti-CYP27A1 Antibody整合α7(ITGα7)

單增李斯特氏菌抵抗樣分子α抗體Anti-CYP2A6 Antibody整合α6(ITGα6)

枯草芽孢桿菌質(zhì)內(nèi)的糖基化蛋白抗體Anti-CYP27A1 Antibody整合α5(ITGα5)

枯草芽胞桿菌性核糖體磷蛋白大亞基P0抗體Anti-CYP27B1 Antibody整合α4(ITGα4)

平菇RAN結(jié)合蛋白3抗體Anti-CYP2D6 Antibody整合α3(ITGα3)

擴(kuò)展青霉環(huán)指蛋白35抗體Anti-CYP2C19 Antibody整合α2(ITGα2)

根瘤菌環(huán)指蛋白70抗體Anti-CYP2E1 Antibody整合α11(ITGα11)

淡紫擬青霉RH血型C糖蛋白抗體Anti-CYP2B6 Antibody整合α10(ITGα10)

黑曲霉磷化雷帕霉靶蛋白復(fù)合體2抗體Anti-CYP2E1 Antibody整合α1(ITGα1)

松口蘑環(huán)指蛋白138抗體Anti-CYP2E1 Antibody真核翻譯延伸因子1γ(EEF1γ)

多根硬皮馬勃（可）Nogo66受體相關(guān)蛋白3抗體Anti-CYP2E1 Antibody(PB0186)真核翻譯起始因子6(EIF6)

成團(tuán)腸桿菌(成團(tuán)泛菌)Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體Anti-CYP2S1 Antibody真核翻譯起始因子4A2(EIF4A2)

拉考夫梅奇酵母Rh血型C抗原抗體Anti-CYP2U1 Antibody著絲粒蛋白I(CENPI)

短穩(wěn)桿菌RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體Anti-CYP3A4 Antibody(PB1111)著絲粒蛋白H(CENPH)

綠木霉Ras樣蛋白A抗體Anti-CYP7A1 Antibody著絲粒蛋白F(CENPF)

谷棒桿菌Corynebacterium│glutamicum 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

ATCC51837=DSM7285=HAMBI2068=IFO(nowNBRC)15208=JCM10276=LMG17328=NCPPB2661資源名稱(chēng): 玫瑰新鞘菌質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

蛹蟲(chóng)草Cordyceps│militaris (L.) Link 質(zhì)量規(guī)格：0.97
磷酸酶抑制劑(PP1活性抑制劑)(Salubrinal)龜裂鏈霉龜裂亞種 4,7,13,16,21-五氧雜-1,10-二氮雜二環(huán)[8.8.5]廿三烷超敏胰島

Lonsdalea quercina subsp. britannica 4-甲氧基-2-三氟瓜組蛋白H3

土生類(lèi)諾卡氏 2--4-氟苯輕脂酞輔脫氫

鴨疫里氏桿 3-并噻吩-2-羧腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白6

黑曲霉 2--5-氟吡啶有機(jī)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體

嗜果膠黃桿 3,5-二甲基異噁唑-4-甲酰鈣網(wǎng)蛋白

簡(jiǎn)青霉 4-甲基-1,10-鄰二氮雜菲脯

深海微桿 1,2,3,4,5-五苯基-1′-(二叔丁基膦)二茂鐵基質(zhì)金屬蛋白7

蘋(píng)果落葉交鏈孢霉雙[1,2-雙(二苯基膦)乙烷]鈀(0)胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1

出芽短梗霉 3-氟吡啶-2-甲14-3-3蛋白

Marinobacter 全氟三丁 (PFTBA)角蛋白

呂氏泰勒蟲(chóng)（崇信株） 5-溴吡啶-2-甲蛋白酪磷

黑曲霉三銠二聚體色P450家族成員2C19

解淀粉芽孢桿 2-(三氟甲基)苯基肼鹽鹽有機(jī)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體2

小馬勃 3-(三氟甲基)苯肼鹽鹽轉(zhuǎn)化蛋白R(shí)hoA-GTP

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