FGFR家族抑制劑(JNJ-42756493)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10467

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：FGFR家族抑制劑(JNJ-42756493)

英文名稱：Erdafitinib

產品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10467

產品介紹:

英文名稱：Erdafitinib

產品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

Erdafitinib是有效的FGFR家族抑制劑；抑制FGFR1-4的活性分別為1.2,2.5,3.0和5.7nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1346242-81-6

別名：JNJ-42756493

純度：99.54%

分子量：446.54

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

鏈輪枝菌環(huán)指蛋白121抗體Anti-DCK Antibody粘蛋白5B(MUC5B)

假單胞菌屬環(huán)指蛋白169抗體Anti-DCN Antibody粘蛋白5AC(MUC5AC)

毛木耳環(huán)指蛋白113A抗體Anti-DCC Antibody粘蛋白4(MUC4)

枯草芽孢桿菌枯草亞種（現貨）環(huán)指蛋白43抗體Anti-DCN Antibody(PB0132)粘蛋白21(MUC21)

舒青霉腫瘤血管內皮標記蛋白2抗體Anti-DCN Antibody粘蛋白20(MUC20)

根瘤菌環(huán)指蛋白14抗體Anti-DCX Antibody粘蛋白17(MUC17)

新城疫病RAS相關GTP結合蛋白A抗體Anti-DDAH1 Antibody粘蛋白13(MUC13)

楊樹菇絲蘇激1受體相互作用蛋白抗體Anti-DDAH2 Antibody粘蛋白12(MUC12)

布蘭克假絲酵母P2凋亡相關蛋白抗體Anti-DDB1 Antibody(PB0607)粘蛋白1(MUC1)

瑞士乳桿菌DNA修復和重組蛋白RAD54B抗體Anti-DDB2 Antibody增殖關聯(lián)蛋白2G4(PA2G4)

玉蜀黍赤霉菌畸胎瘤癌基因RAS相關病抗體Anti-DDIT3 Antibody造血蛋白1(HEM1)

乳乳球菌霍氏亞種Ras-GTP激活蛋白3抗體Anti-DDB2 Antibody造血蛋白(HEMGN)

神經內分泌特異性蛋白抗體Anti-DDR1 Antibody造骨鈣黏蛋白(CDHOB)

接骨木鐮孢視黃脫氫11/型肝炎病核心蛋白抗體Anti-DDR1 Antibody皂(Haponin)

釀酒酵母維甲相關孤兒受體β抗體Anti-DDR2 Antibody早幼粒白血病蛋白(PML)

黃綠木霉G蛋白GTP-GDP解離激因子1抗體Anti-DDT Antibody早期生長應答因子4(EGR4)

ATCC9372資源名稱: 芽孢桿菌質量規(guī)格：BR，98.5%

灰平鏈霉菌Streptomyces│griseoplanus Backus et al. 質量規(guī)格：>98%,BR

柳樹爛皮病Cytospora│salicis (Corda) Rabenh. 質量規(guī)格：>99%,BR
FGFR家族抑制劑(JNJ-42756493)纖細海勒蒙氏 N,N-二-對P65蛋白

軟帕氏孔 N,N-二-對核因子激活劑

毛地黃殼針孢 5-羥基煙甲酯核因子κB抑制因子β

松口蘑 5-乙酰基-2-氨基-4-甲基噻唑氨甲酰磷合成1

粘質沙雷氏全氟辛烷苯羥化

白紋羽對五聯(lián)苯脂蛋白關聯(lián)磷脂A2

表皮葡萄球全氟己血小板活化因子乙酰水解

晉寧斯塔莫酵母 2-(三氟甲基)嘧啶-5-羧色P450C17

Marella radicis 十八烷基氧基硅烷Noggin

白杯蕈辛基氧基硅烷趨化

施式假單胞 4 -(2甲基4噻唑基)可溶性鳥環(huán)化

香菇* 2-乙酰氨基-3,4,6-三-O-乙酰-2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖?；扇苄曾B環(huán)化B1

根瘤四乙酰基-α-D-半乳糖N鈣粘著蛋白;上皮性鈣黏附蛋白

光滑鏈霉 1,2-二甲基-3-羥基-4-吡啶酮3甲基組
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)