脫乙酰化酶抑制劑(HDAC抑制劑)(TMP269)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10631

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：脫乙酰化酶抑制劑(HDAC抑制劑)(TMP269)

英文名稱：TMP269

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào)：FS-X10631

產(chǎn)品介紹:

TMP269是一種有效的，選擇性的脫乙酰化酶(HDAC)抑制劑，能夠抑制HDAC4/HDAC5/HDAC7/HDAC9，IC50值分別為157nM，97nM，43nM和23nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1314890-29-3

純度：98.42%

分子量：514.52

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

金龜子綠僵菌PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT5B Antibody肝型脂肪結(jié)合蛋白(FABP1)

白齒菌PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT5B Antibody肝生長(zhǎng)因子受體(HGFR)

韋梅擬盤多毛孢 APC標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT6 Antibody肝癌相關(guān)蛋白1(HCRP1)

暗擬莖點(diǎn)霉Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT6 Antibody肝2(HPA2)

纖維単胞菌Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAU2 Antibody肝(HPA)

總狀毛霉Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAT6 Antibody肝結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HBEGF)

根霉Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STIM1 Antibody(PB0461)肝受體同源物1(LRH1)

嗜熱鏈球菌PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAU1 Antibody肝腎骨堿性磷(ALPL)

膨大彎頸霉PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STAU1 Antibody肝配蛋白B3(EFNB3)

蠟狀芽孢桿菌堿性磷（AP）標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STIP1 Antibody肝配蛋白B2(EFNB2)

釀酒酵母膠體金標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STK3/MST-2 Antibody肝配蛋白B1(EFNB1)

大腸埃希氏菌Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STMN1 Antibody肝配蛋白A受體3(EPHA3)

變幻青霉PE標(biāo)記的小鼠抗人IgMAnti-STK11 Antibody肝配蛋白A受體10(EPHA10)

Micromonospora羅丹明標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-STRA8 Antibody肝配蛋白A受體1(EPHA1)

綠色木霉菌膠體金標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-STUB1 Antibody肝配蛋白A5(EFNA5)

Klebsiella pneumoniae堿性磷（AP）標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-STRA8 Antibody肝配蛋白A4(EFNA4)

絲/蘇激蛋白PIM1+PIM3抗體抗金屬伯克霍爾德氏菌前列腺上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物

PUM2蛋白抗體尕海湯飛凡菌皮膚表皮角質(zhì)形成細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物

蛋白體PSMα4/20SProteasomeα4抗體假交替單胞菌屬小腦顆粒細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物

Phocein蛋白抗體普通青霉結(jié)腸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物
脫乙?；敢种苿?/span>(HDAC抑制劑)(TMP269)假單胞屬 2,5-己二酮腫瘤壞死因子α

豌豆根瘤 (S)-吡咯烷-3-甲甜菜堿

毛頭鬼傘，雞腿菇 (R)-吡咯烷-3-甲骨鈣

釀酒酵母甲鎂骨橋

緊密假諾卡氏 2-甲氧基乙促性腺釋放

梭 (2-)肼Bcl-2相關(guān)X蛋白

托姆青霉 (R)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異基吡B瘤因子2

泛枝芽胞桿 N-Fmoc-N'-三苯甲基-L-組五氟苯基酯色C

腫塊芽孢桿屬 (R)-1-Boc-3-羥基吡咯烷半胱蛋白3

栗疫 N-Fmoc-N'-Boc-L-鳥半胱蛋白6

金針菇 N-Boc-4-羥基半胱蛋白7

嗜中溫寒冷桿二氫羅丹明123半胱蛋白8

釀酒酵母 Dichlorobis(2-(diisopropylphosphino)-乙)釕(II)半胱蛋白9

銀白離褶傘 (1S,2S)-2-[(4R,11bS)-3,5-dihydro-4H-dinaphtho[2,1-熱休克蛋白90

果生鏈核盤 BOC-L-環(huán)己基甘骨成型蛋白受體1B
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)