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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 抗凋亡蛋白BCL-2抑制劑(Obatoclax)
貨號(hào) | FS-X10632 |
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產(chǎn)品介紹:
Obatoclax是抗凋亡蛋白BCL-2的抑制劑,對(duì)抗凋亡蛋白BCL-2的平均IC50值為3μM,包括2.9μM(Mcl-1)和5μM(Bfl-1)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):803712-79-0 別名:Obatoclax Mesylate;GX15-070 純度:99.20% 分子量:413.49 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
英文名稱:Obatoclax
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10632
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
皺褶莫氏黑粉菌生物標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-STMN1 Antibody(PB0596)肝配蛋白A3(EFNA3)
平菇Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-STS Antibody肝配蛋白A2(EFNA2)
雅致枝霉PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-STRAP Antibody(PB0476)肝配蛋白A1(EFNA1)
苔草草拉氏桿菌*PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-STX1A Antibody肝膠原凝集1(CLL1)
球毛殼菌(可訂購(gòu))Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-STXBP1 Antibody肝腸鈣黏蛋白(CDH17)
異常漢遜酵母異常變種Cy3標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-SUB1 Antibody(PB1138)肝癌源性生長(zhǎng)因子(HDGF)
腐皮殼屬Cy5標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-STXBP2 Antibody甘油激(GLYCTK)
松口蘑Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-SUFU Antibody甘油-3-磷脫氫(GAPDH)
嗜水氣單胞菌Cy7標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-SULT2B1 Antibody甘油磷肌錨定高密度脂蛋白結(jié)合蛋白1(GPIHBP1)
空泡單胞菌PE標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-SUZ12 Antibody甘油磷二酯磷二酯1(GDE1)
亮白曲霉PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-SYCP3 Antibody甘油磷磷二酯(GPCPD1)
靈芝PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-SYK Antibody甘油磷-O-?;D(zhuǎn)移(GNPAT)
頭狀莖點(diǎn)霉APC標(biāo)記的小鼠抗羊IgGAnti-SULT2A1 Antibody甘油激5(GK5)
平菇生物標(biāo)記的小鼠抗兔IgGAnti-SUMO1 Antibody甘油激2(GK2)
蠟狀芽孢桿菌辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的小鼠抗兔IgGAnti-SYK Antibody甘油激(GK)
淡紫擬青霉Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgGAnti-SYN1 Antibody甘露糖受體C2(MRC2)
多胺調(diào)制因子結(jié)合蛋白1抗體枯草芽孢桿菌噬菌體肺上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞提取物
B淋巴細(xì)胞白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子3抗體葡萄球菌屬原代組織提取物
B淋巴細(xì)胞白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體青霉屬人血管組織提取物
B淋巴細(xì)胞白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子2抗體甲基桿菌屬人髂動(dòng)脈組織提取物
抗凋亡蛋白BCL-2抑制劑(Obatoclax)原小單胞 (1S,2S)-2-(Diphenylphosphino)-2,3-dihydro-1H-inden環(huán)氧化2
雞傷門氏 4,4'-雙(羥甲基)-2,2'-二吡啶吻
Flavihumibacter 1-噻蒽色羥化1
瓶形毛殼 二苯并噻吩-4-糖皮質(zhì)
惡臭假單胞 3-氨基-2-鹽皮質(zhì)
繩狀籃狀 二芐基 N,N-二異基亞磷酰5-羥基色
異常威克漢姆酵母 異胞嘧啶吻54
枯草芽孢桿 乙酰酮鋅抗泰勒焦蟲病
冠突曲霉 tert-Butyl N-[3-(Aminomethyl)benzyl]carbamate弓形蟲
嬰兒芽胞桿 四氨合化鉑 水合物旋毛蟲
蘇云金芽孢桿 重去甲腎上腺一水合物傳染性胸膜肺炎
尿八疊球 1,4-哌二乙磺二鹽(PIPES-K2)魏氏梭病
西藏根瘤 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphate (sodium salt梭抗體
釀酒酵母 POPSO 倍半鈉鹽硫代反應(yīng)物
腦膜炎膿性黃桿(P2實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)證明) γ-戊內(nèi)酯球蛋白
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