Bcr-Abl/Lyn抑制劑(Bafetinib)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10634

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Bcr-Abl/Lyn抑制劑(Bafetinib)

英文名稱：Bafetinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10634

產(chǎn)品介紹:

Bafetinib(INNO-406)是一種有效的雙重Bcr-Abl/Lyn抑制劑,IC50值為5.8nM/19nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：859212-16-1

別名：INNO-406;NS-187

純度：99.27%

分子量：576.62

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大腸桿菌Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgMAnti-TAF12 Antibody甘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GLYT2)

產(chǎn)黃青霉PE標(biāo)記的小鼠抗兔IgMAnti-TAGLN Antibody甘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLYT1)

佛雷德里克斯堡假單胞菌APC標(biāo)記的小鼠抗兔IgMAnti-Talin 1/TLN1 Antibody甘脫氫(GLDC)

鞘盒菌屬Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗兔IgMAnti-TAL1 Antibody甘脒基轉(zhuǎn)移(GATM)

黑木耳Cy3標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TANK Antibody蓋膜蛋白β(TECTβ)

Pseudomonas extremaustralisCy5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TAP2 Antibody蓋膜蛋白α(TECTα)

淺白隱球酵母Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TAP1 Antibody(PB0868)鈣周期結(jié)合蛋白(CACYBP)

釀酒酵母Cy7標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TAT Antibody鈣粘蛋白EGFLAG七經(jīng)G-型受體2(CELSR2)

彩色豆馬勃PE標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TAZ Antibody鈣營(yíng)養(yǎng)蛋白1(CALN1)

乙型溶血性鏈球菌PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBC1D4 Antibody鈣網(wǎng)蛋白3(CALR3)

蘇云金芽孢桿菌PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TAZ Antibody鈣同線蛋白3(CLSTN3)

溶桿菌APC標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBK1 Antibody鈣同線蛋白2(CLSTN2)

赭綠青霉Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBP Antibody鈣同線蛋白1(CLSTN1)

花臉蘑Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBP Antibody鈣調(diào)(RGN)

釀酒酵母Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBP-1/PSMC3 Antibody鈣調(diào)寧蛋白2(CNN2)

哈茨木霉Alexa Fluor 647標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBX5 Antibody鈣調(diào)寧蛋白1(CNN1)

細(xì)胞質(zhì)磷1抗體考克氏菌屬人小腸粘膜組織提取物

磷烯羧激抗體鞘菌屬人食管組織提取物

多聚合α抗體赤霉菌屬人結(jié)腸組織提取物

多聚合g抗體輪層炭菌屬（斜面）人小腸組織提取物
Bcr-Abl/Lyn抑制劑(Bafetinib)鑲邊鏈霉乙二溶液脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

泡盛曲霉變種乙二脂肪結(jié)合蛋白

大腸埃希氏正丁鋯鈉耦合中性氨基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1

球孢白僵 2,5-二甲氧基苯鈉耦合中性氨基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2

突孢毛殼雙(基硅烷基)氨基鈉鈉耦合中性氨基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3

淡紫擬青霉丁二單乙酯鈉耦合中性氨基轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4

新疆鹽地桿鹽格拉瓊L型氨基轉(zhuǎn)運(yùn)載體1

根癌土壤桿 Poly(D-lactide)L型氨基轉(zhuǎn)運(yùn)載體1

膜醭畢赤酵母 1,2-二硬脂?；?sn-三基-3-磷脂酰乙(DSPE)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1

葡萄根瘤 N-Boc-L-異亮氨脂肪轉(zhuǎn)位

小腸腸球 2-三氟甲基-3-葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3

青霉屬二氧化乙烯基環(huán)己烯葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4

醋桿屬 4-乙烯基環(huán)氧環(huán)己烷L(zhǎng)型氨基轉(zhuǎn)運(yùn)載體3

圍小叢殼乙鈉L型氨基轉(zhuǎn)運(yùn)載體4

厚粉紅隔孢伏革酮基膦二乙酯脂肪結(jié)合蛋白4
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)