ASK1抑制劑(Selonsertib)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10635

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：ASK1抑制劑(Selonsertib)

英文名稱：Selonsertib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10635

產(chǎn)品介紹:

GS-4997是一個高的，有選擇性和強(qiáng)的ASK1抑制劑，在ASK1催化激酶中競爭ATP。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1448428-04-3

別名：GS-4997

純度：98.04%

分子量：445.49

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

Melanconis PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBX21 Antibody鈣調(diào)蛋白樣蛋白5(CALML5)

鹽地喜鹽芽孢桿菌生物標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TCF7 Antibody鈣調(diào)蛋白樣蛋白3(CALML3)

異常畢赤酵母PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TBX21 Antibody鈣調(diào)蛋白3(CALM3)

釀酒酵母羅丹明標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TCF7L1 Antibody鈣調(diào)蛋白2(CALM2)

鹿皮色曲霉FITC標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TCP1 Antibody(PB0871)鈣調(diào)蛋白1(CALM1)

膠孢膠體金標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TDRD3 Antibody鈣黏蛋白9(CDH9)

擬莖點(diǎn)霉堿性磷（AP）標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgGAnti-TEC Antibody鈣黏蛋白8(CDH8)

根霉Cy5標(biāo)記的小鼠抗牛IgGAnti-TEC Antibody鈣黏蛋白7(CDH7)

槐栓菌Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗牛IgGAnti-TECTA Antibody鈣黏蛋白26(CDH26)

松針散斑殼Cy7標(biāo)記的小鼠抗牛IgGAnti-TEK Antibody鈣黏蛋白24(CDH24)

菊池鏈格孢PE標(biāo)記的小鼠抗牛IgGAnti-TEK Antibody鈣黏蛋白23(CDH23)

黑木耳PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗牛IgGAnti-TEK Antibody鈣黏蛋白22(CDH22)

卷曲鏈霉菌PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗牛IgGAnti-TERF2 Antibody鈣黏蛋白20(CDH20)

厚環(huán)粘蓋牛肝菌APC標(biāo)記的小鼠抗牛IgGAnti-TET1 Antibody鈣黏蛋白19(CDH19)

高地芽孢桿菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗牛IgGAnti-TERT Antibody鈣黏蛋白18(CDH18)

土曲霉Alexa Fluor 488標(biāo)記的小鼠抗牛IgGAnti-TERT Antibody鈣黏蛋白12(CDH12)

腫瘤抑制相關(guān)蛋白PHEMX抗體派倫霉屬人直腸組織提取物

4-磷磷脂酰肌5激1樣蛋白抗體榛針孢酵母人支氣管組織提取物

多型性腺瘤基因1蛋白抗體湖南類芽胞桿菌人肺動脈組織提取物

細(xì)胞膜鈣ATP1抗體玫瑰黃鞘單胞菌人呼吸道組織提取物
ASK1抑制劑(Selonsertib)洋蔥伯克霍爾德 ?；寝D(zhuǎn)運(yùn)載體

球孢白僵二乙?；鵞(S)-(-)-2,2'-雙(二-P-苯基磷酰)-1,1'聯(lián)萘]釕球蛋白E

蘑菇假單胞基硅內(nèi)因子

大腸埃希氏桿乙鉻調(diào)節(jié)性T

木豆根瘤鹽坦索羅辛蓋他病抗體

土地桿屬 N-Boc-D-苯氨胎盤泌乳

仙人掌有孢漢遜酵母 2-氨基-4-(三氟甲基)吡啶脂聯(lián)

硬水黃桿 BOC-D-纈氨脂蛋白脂

細(xì)鏈格孢 BOC-D-氨硬脂酰去飽和

無色殼囊孢 3-羥基-4-溴甲酯蘋果脫氫

紅根須腹 Risperidone異檸檬脫氫

釀酒酵母 4-[(4-甲基哌-1-基)甲基]糖原合成激

根癌土壤桿香茅脂肪結(jié)合蛋白3

嗜糖土地芽孢桿四氫香葉過氧化物體增殖物激活受體β

耐寒短桿 (S)-(-)-2,6-二氨基-4,5,6,7-四氫苯并噻唑天門冬氨基轉(zhuǎn)移
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)