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當(dāng)前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> CDK2，JAK2和FLT3抑制劑(SB1317)
| 貨號 | FS-X10973 |
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培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱：CDK2，JAK2和FLT3抑制劑(SB1317)
英文名稱：SB1317
產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號：FS-X10973
產(chǎn)品介紹:
SB1317是一種有效的CDK2，JAK2和FLT3抑制劑，IC50分別為13，73和56nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：937270-47-8 別名：TG02 純度：98.54% 分子量：372.46 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
白僵菌凋亡原位（我公提供代測服務(wù)）Escherichia coli小鼠癌標(biāo)志物-CA153
溜曲霉Escherichia coli小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199
谷棒桿菌Escherichia coli小鼠胃腸癌標(biāo)志物CA199
尖孢鐮刀菌Escherichia coli小鼠血紅氧合1(HO-1)
蚜蟲枝孢Escherichia coli小鼠血紅氧合1(HO-1)
豇豆慢生根瘤菌Escherichia coli小鼠磷脂A2(PL-A2)
大腸埃希氏菌Escherichia coli小鼠磷脂A2(PL-A2)
白色類諾卡氏菌（可定）Escherichia coli小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)
涎沫假絲酵母Escherichia coli小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)
殼青霉Escherichia coli小鼠水通道蛋白5(AQP-5)
臘梅擬莖點霉廣譜SP免疫組化（用于檢測兔、大鼠、小鼠和豚鼠來源的一抗）Escherichia coli小鼠水通道蛋白5(AQP-5)
矩圓黑盤孢SP免疫組化(兔)Escherichia coli小鼠水通道蛋白4(AQP-4)
雅致放射毛霉SP免疫組化(小鼠)Escherichia coli小鼠水通道蛋白4(AQP-4)
塔賓曲霉T淋巴亞群檢測盒（SAP法）Escherichia coli小鼠水通道蛋白3(AQP-3)
Sphingobacteriaceae封閉用正常山羊血清（原液）Escherichia coli小鼠水通道蛋白3(AQP-3)
解酯假絲酵母解酯變種封閉用正常兔血清（原液）Escherichia coli小鼠水通道蛋白1(AQP-1)
鼻咽上皮細(xì)胞特異性蛋白1抗體血痕韌革菌小鼠綠色熒光標(biāo)記的肺癌細(xì)胞
軸突生長誘向因子4抗體粘滑菇屬HSF（DMEM(高糖）+15%FBS 澳洲胎牛）
核基質(zhì)蛋白22復(fù)瓣黑刺革菌小鼠結(jié)締組織L細(xì)胞株929克（小鼠成纖維細(xì)胞）
神經(jīng)內(nèi)分泌轉(zhuǎn)化2抗體漏斗狀側(cè)耳人晶體上皮細(xì)胞永生系
CDK2，JAK2和FLT3抑制劑(SB1317)釀酒酵母 Carbamic acid甲基睪酮
釀酒酵母 Epinodosin腺活化蛋白激
谷棒桿Ⅰ型 Shikokianin腺活化蛋白激
Paenibacillus Glychionide A卵母成熟抑制因子
鳥微屬 Rubrisandrin AD-乳
曲霉 Eucalyptolic acid一氧化氮合成
釀酒酵母 Jacoumaric acid單氧化
大腸埃希 Platyconic acid A纖溶原
產(chǎn)蛋下降綜合征病 Rabdosin B巨噬移動抑制因子
球孢白僵 Kusunokinin低氧誘導(dǎo)因子1
曲霉 Prionoid B腦紅蛋白
匍匐曲霉原變種 Lucidal抗性磷5b
綠色木霉 Erythrinin A組織蛋白K
球孢白僵 Brosimacutin G骨特異性堿性磷B
大腸埃希氏 Bakuchalcone低氧誘導(dǎo)因子-1α
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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