實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
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參數(shù)規(guī)格：
產品名稱：亨德拉病毒核酸檢測試劑盒
產品規(guī)格：50T
產品貨號：FS-P10182
產品分類：熒光PCR法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
發(fā)酵放線纖絲菌培養(yǎng)基: 2模式菌株: no養(yǎng)豬發(fā)掘出墊料提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

需鹽桿菌培養(yǎng)基: 512大西洋細菌水樣/下層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法；-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法

小單孢菌屬抗細菌；抗枯草芽孢桿菌；活性物質；具有抑制彈性蛋白酶的活性模式菌株: no樹根土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C

廈門海旋菌1.海洋石油污染生物修復; 2.生物活性物質篩選模式菌株: no水樣/深層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃

 -105℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

雜色曲霉原變種生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0015提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

弓形蟲(GJS－4株)主要用于科研、教學診斷液等模式菌株: no豬淋巴結提供形式: 其他安全等級: 2培養(yǎng)基: 0生長條件: 37

 HBUM70097模式菌株: no安全等級: 1種屬: Streptomyces│sp.土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃

金頂側耳(榆黃蘑)生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法；礦物油法；定期移植法

鮑曼不動桿菌生長條件: 36℃模式菌株: no膿液提供形式: 凍干物安全等級: 2 -80℃冰箱凍結法

蠟樣芽孢桿菌淀粉酶模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0070生長條件: 28-30℃

 -106℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

百日咳博德特氏菌生長條件: 37℃培養(yǎng)基: CM0119提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no 真空冷凍干燥法

 IFFI2377培養(yǎng)基: 77性蛋白酶種屬: Aspergillus│niger提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法;定期移植法

淡紫擬青霉生長條件: 25培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法

IMRUR1547培養(yǎng)基: 0011模式菌株: no種屬: Saccharopolyspora│hirsuta提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

LPMAgarAdditive

NLN培養(yǎng)基 NLN Medium

D-E中和肉湯 E Neutralizing Broth 250克 經防腐劑或消劑處理的樣品增菌培養(yǎng)

YPD瓊脂250g/瓶分子生物學實驗中酵母菌的培養(yǎng)和保存incubationmediaYPD瓊脂250g/瓶分子生物學實驗中酵母菌的培養(yǎng)和保存

FilterMembraneEnterococcusAgar

脫氧膽鈉枸櫞鹽瓊脂  Desoxycholate Citrate Agar  250克  細菌總數(shù)的測定和分離培養(yǎng),沙門氏菌分離培養(yǎng)

DCLS瓊脂  DCLS Agar  250克  致病性腸桿菌的分離

Vogel-Johnson瓊脂  VJ Agar  250克  病源標本和其他標本中甘露醇陽性金黃色葡萄球菌的選擇性分離

NAC瓊脂培養(yǎng)基  NAC Agar Medium  100克  假單胞菌屬分離培養(yǎng)
亨德拉病毒核酸檢測試劑盒3%過氧化氫酶試劑規(guī)格：2ml/支*20用途：用于空腸彎曲菌過氧化氫酶試驗

苦杏仁苷規(guī)格：1g用途：微生物指示劑

腦心浸出液肉湯（BHI）顆粒規(guī)格：250g用途：用于細菌的增菌培養(yǎng)或純化培養(yǎng)(GB標準)

沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于藥品抑菌劑效力檢測中真菌檢測

瓊脂培養(yǎng)基K(XLD瓊脂)規(guī)格：250g用途：用于沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）顆粒規(guī)格：250g用途：用于霉菌和酵母菌的計數(shù)和分離培養(yǎng)