BTK抑制劑(Acalabrutinib)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10373

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：BTK抑制劑(Acalabrutinib)

英文名稱：Acalabrutinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10373

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Acalabrutinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

Acalabrutinib是一種新穎的，有效的，選擇性的BTK抑制劑，在人全血CD69B細(xì)胞激活試驗(yàn)中，IC50和EC50分別為3nM和8nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1420477-60-6

別名：ACP-196

純度：98.74%

分子量：465.51

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

黃蓋小脆柄菇神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白1抗體Human FABP3(Fatty Acid Binding Protein 3, Muscle and Heart) 基質(zhì)衍生因子1α(SDF-1α)

芝麻專化型神經(jīng)損傷誘導(dǎo)蛋白2抗體Human cTnI(Cardiac Troponin-I) 基質(zhì)衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)

接骨木鐮孢絲/蘇蛋白激Nek3抗體Human Myo(Myoglobin) 基質(zhì)衍生因子1a(SDF1A)

雞傷門氏菌中心體相關(guān)蛋白激Nek2抗體Human CK-MB(Creatine Kinase MB) 基質(zhì)裂解(ST3)

布氏白僵菌神經(jīng)顆?？贵wHuman NT-proBNP(N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide) 基質(zhì)裂解(ST2)

謝瓦氏曲霉神經(jīng)肽S抗體Human GHRL(Ghrelin) 基質(zhì)裂解(ST1)

蘋果鏈格孢神經(jīng)肽S抗體Human WISP1/CCN4(WNT1-inducible-signaling pathway protein 1) 基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶(MAT)

釀酒酵母神經(jīng)肽S受體1/G蛋白偶聯(lián)受體154抗體Human EPO(Erythropoietin) 基質(zhì)金屬蛋白組織抑制因子1(TIMP-1)

阿布拉鏈霉菌G蛋白偶聯(lián)受體66/神經(jīng)調(diào)節(jié)肽U受體1抗體Human TIMP-1(Metalloproteinase inhibitor 1) 基質(zhì)金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)

異樣纖維單胞菌G蛋白偶聯(lián)受體FM4/神經(jīng)調(diào)節(jié)肽U受體2抗體Human IGFBP-4(Insulin-like growth factor-binding protein 4) 基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)

瑞士乳桿菌神經(jīng)肽S抗體Human Lptn/XCL1(Lymphotactin) 基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)

橙色桿菌屬腎上腺發(fā)育不全相關(guān)蛋白抗體Human TIMP-3(Metalloproteinase inhibitor 3) 基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1(TIMP-1)

貝倫格葡萄座腔菌梨生?；托透窝撞》墙Y(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9抗體Human TIMP-2(Metalloproteinase inhibitor 2) 基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)

豌豆根瘤菌Noxa蛋白抗體Human TIMP-4(Metalloproteinase inhibitor 4) 基質(zhì)金屬蛋白9(MMP-9)

氧化節(jié)桿菌P53誘導(dǎo)凋亡抑制蛋白抗體Human TF/F3(Tissue factor) 基質(zhì)金屬蛋白8/中性粒膠原(MMP-8)

細(xì)孢毛霉磷化酪激B抗體Human LY75(Lymphocyte antigen 75) 基質(zhì)金屬蛋白7(MMP-7)

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>97.5%,BR二氫丹參I

臭曲霉Aspergillus│foetidus 質(zhì)量規(guī)格：2,000-5,000 units/mg，進(jìn)分丹參I

曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR丹參IIA-磺鈉
BTK抑制劑(Acalabrutinib)貴州綠僵 4-羥信號3A

粘蓋牛肝* 1-基-4-(二甲氨基)吡啶四氟鹽信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7

雞傷門氏順式-1-溴-1-烯性別決定區(qū)Y框蛋白9

大腸埃希氏 2-氨基-5-溴-3-甲氧基吡性結(jié)合球蛋白

柿盤多毛孢二乙基亞磷酰胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子

Albidiferax 4-溴芐胸腺β4

南方鹽單胞 3-氨基-5-溴-2-吡啶

維羅納假單胞 2,7-二叔丁基芴雄

大腸埃希氏 Proparacaine HCl雄受體

松口蘑 4-基-4'-基聯(lián)苯雄烯二酮

枯草芽孢桿 4'-乙基-4-聯(lián)二苯溴脫氧核

2,2'-二氨基二苯硫血管活性腸肽

紫紅曲霉（±）-樟腦-10-磺血管緊張1-7

植物乳桿植物亞種 3-乙基苯血管緊張Ⅱ受體1

高溫放線科未定屬 4-溴異苯血管緊張Ⅱ受體1抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)