EGFR/HER2抑制劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10542

英文名稱：Afatinib dimaleate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10542

產(chǎn)品介紹:

Afatinib dimaleate是一種不可逆的EGFR/HER2抑制劑，有效作用于野生型和突變型EGFR和HER2，作用于EGFRwt，EGFRL858R，EGFRL858R/T790M和HER2，IC50分別為0.5nM，0.4nM，10nM和14nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：850140-73-7

別名：BIBW 2992MA2;BIBW2992;Afatinib

純度：99.81%

分子量：718.08

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

新疆鹽地桿菌線粒體脫偶連蛋白2抗體Anti-LIMK2 Antibody神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT4)

擴(kuò)展青霉線粒體脫偶連蛋白3抗體Anti-LIMK1 Antibody神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)

丁梭菌UBX結(jié)構(gòu)域域蛋白D2抗體Anti-LIF Antibody(PB0067)神經(jīng)型一氧化氮合(NOS1)

紅色蠟?zāi)⒎毫蝓?/span>L3抗體Anti-LMAN1 Antibody神經(jīng)酰激(CERK)

側(cè)孢短芽孢桿菌泛硫酯L1+3抗體Anti-LIN28A Antibody神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白2(NRP2)

大腸桿菌人狀瘤病E6相關(guān)蛋白抗體Anti-LIPC Antibody神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白1(NRP1)

膠孢泛蛋白連接Q1抗體Anti-LMNB2 Antibody神經(jīng)纖維2(NF2)

大腸埃希氏菌泛蛋白連接U抗體Anti-LMO1 Antibody神經(jīng)纖維1(NF1)

嗜假諾卡氏菌泛載體蛋白L6抗體Anti-LMO2 Antibody神經(jīng)黏附分子(NCAM)

禾谷鐮孢菌*泛激活2H抗體Anti-LONP1 Antibody神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白4(NXPH4)

嗜乳桿菌泛蛋白連接G1抗體Anti-LMTK3 Antibody神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白3(NXPH3)

棒曲霉泛蛋白連接E1抗體Anti-LOC134147/CMBL Antibody神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白2(NXPH2)

枯草芽孢桿菌枯草亞種泛蛋白連接E3抗體Anti-LOC134147/CMBL Antibody神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白1(NXPH1)

Marisediminicola泛蛋白連接2E2抗體Anti-LOX Antibody神經(jīng)突蛋白1(NRN1)

黃絮鱗鵝膏菌泛蛋白連接D4抗體Anti-LOXL2 Antibody神經(jīng)調(diào)節(jié)肽U受體1(NMUR1)

環(huán)狀芽胞桿菌泛蛋白連接D3抗體Anti-LOR Antibody神經(jīng)調(diào)節(jié)4(NRG4)

SET結(jié)合蛋白1抗體熱紫鏈霉菌大鼠腎上皮細(xì)胞

電壓門控鈉通道5α抗體巴氏生孢八疊球菌大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞

沉默調(diào)節(jié)蛋白5抗體大腸桿菌BS-3234大鼠腎小管上皮細(xì)胞

葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4增強(qiáng)因子抗體膿腫分枝桿菌大鼠腎足突細(xì)胞
EGFR/HER2抑制劑皺膜假絲酵母 5--3-支原體

泰安羧利用桿變藍(lán)白痢雞傷寒抗體

長雙歧桿甘氨酰甘芐酯對甲苯磺鹽副嗜血桿

玫瑰色熱微甘芐酯鹽鹽P53蛋白

球毛殼 4-氟苯氧基乙酰肼H9型病

Roseivivax isoporae 4-(三氟甲氧基)芐傷門氏抗體

蠟蚧 3,5-二硝基-L-酪副傷門氏抗體

乳乳球乳亞種 1-乙炔基環(huán)戊禽呼腸孤病

貝倫格葡萄座腔 4--3-(三氟甲基)苯甲禽痘病

三葉草根瘤 Tyr-Phe禽腦脊髓炎病

堅強(qiáng)芽孢桿蘇丹藍(lán)II禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病

破傷風(fēng)梭對硝基肉桂禽白血病病

纖細(xì)芽孢桿 2,2-二甲基琥珀酐傳染性法氏囊病

桃色歐文氏 4-溴苯鄰二傳染性喉氣管炎病

大腸埃希 (S)-(+)-5-羥甲基-2-吡咯烷酮禽呼腸孤病抗體

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