β-聯(lián)蛋白激動劑(WAY-262611)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10977

中文名稱：β-聯(lián)蛋白激動劑(WAY-262611)

英文名稱：WAY-262611

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10977

產(chǎn)品介紹:

WAY-262611是無翼的β-聯(lián)蛋白激動劑，可增加骨形成速率，在TCF-熒光素酶測定實驗中的EC50值為0.63μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1123231-07-1

純度：99.08%

分子量：318.42

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

海岸擬諾卡氏菌全血基因組DNA提取試劑盒Escherichia coli小鼠神經(jīng)肽Y(NP-Y)

銹色淺野氏菌酵母基因組提取試劑盒Escherichia coli小鼠生長激釋放多肽(GHRP)

大腸埃希氏桿菌質(zhì)粒小量提取試劑盒Escherichia coli小鼠生長激釋放多肽(GHRP)

運動節(jié)桿菌凝膠回收試劑盒Escherichia coli小鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)

焦曲霉DNA產(chǎn)物純化試劑盒Escherichia coli小鼠凝溶膠蛋白(Gelsolin)

球孢白僵菌植物基因組提取試劑盒Escherichia coli小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)

巴基斯坦賴芽孢桿菌細菌基因組提取試劑盒Escherichia coli小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)

威克克魯維酵母動物/組織基因組提取試劑盒Escherichia coli小鼠血栓前體蛋白(TpP)

膠孢T4 DNA連接Escherichia coli小鼠血栓前體蛋白(TpP)

Pragia sp.T4 DNA連接Escherichia coli小鼠促性腺激釋放激(GnRH)

墳?zāi)构?jié)桿菌T4 DNA 激Escherichia coli小鼠促性腺激釋放激(GnRH)

黃色短桿菌T4 DNA 激Escherichia coli小鼠抑制B(INH-B)

解淀粉芽孢桿菌重組Taq DNA 聚合Escherichia coli小鼠抑制B(INH-B)

孟氏假單胞菌重組Taq DNA 聚合Escherichia coli小鼠促甲狀腺釋放激(TRH)

釀酒酵母重組Taq DNA 聚合Escherichia coli小鼠促甲狀腺釋放激(TRH)

長枝木霉重組Taq DNA 聚合Escherichia coli小鼠促腎上皮質(zhì)激釋放激(CRH)

2型神經(jīng)纖維瘤抗體須殼孢新生牛眼Tenon's囊成纖維細胞

NFkB誘導(dǎo)激抗體茶葉葉點霉人APP-PS1(C4Y)雙基因轉(zhuǎn)染細胞株

細胞核因子/k基因結(jié)合核因子抗體露濕粘座孢霉（或露濕漆斑菌）人APP基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株

低分子量神經(jīng)絲蛋白抗體爪哇毛霉C3H/An小鼠結(jié)締組織細胞（L929-TK-）
β-聯(lián)蛋白激動劑(WAY-262611)稀疏鏈霉 Heveaflavone精代琥珀裂解

植物乳桿 Torachrysone精

非洲馬瘟?。?/span>VII型）丹芝A8-羥基脫氧鳥

傳染性支氣管炎病 Rubranol氨基合成

短雙歧桿長春質(zhì)堿肌合成

球孢白僵 Fustin氨基合成

串泡兩型毛霉原變種茵陳色原酮肌合成

螺旋聚孢霉 SinapaldehydeAMP激活蛋白激α

硝鹽還原燈盞花組織蛋白D

巴氏醋桿 Humulene epoxide II蘋果脫氫

葡枝根霉乙酰紫草線粒體呼吸鏈復(fù)合物I

根霉 Salvisyrianone雌酮

假單胞屬靈芝A雄烯二酮

諾卡氏 Piperolactam C雌三

新疆鹽地桿靈芝酮A鈉;離子轉(zhuǎn)運ATPβ1肽

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