REV-ERBα/β激動(dòng)劑(SR9011)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10796

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：REV-ERBα/β激動(dòng)劑(SR9011)

英文名稱：SR9011

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10796

產(chǎn)品介紹:

SR9011是一種REV-ERBα/β激動(dòng)劑，作用于REV-ERBα和REV-ERBβ，IC50s分別為790nM和560nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1379686-29-9

純度：99.92%

分子量：479.04

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

水原市土地桿菌大鼠Ⅰ型前膠原N端前肽Anti-MRPL14 Antibody人生長激(HGH)

乳桿菌屬人白三烯D4Anti-MRPL13 Antibody人生長激(HGH)

嗜中溫寒冷桿菌小鼠抗核抗體Anti-MRPL15 Antibody人紅生成(EPO)

耐輻射奇球菌兔抑瘤MAnti-MRPL18 Antibody人紅生成(EPO)

小海綿羊肚菌小鼠鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白Anti-MRPL21 Antibody人紅生成受體(EPOR)

漢遜德巴利酵母大鼠解整合樣金屬蛋白9Anti-MRPL20 Antibody人紅生成受體(EPOR)

大腸埃希氏菌人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白Anti-MRPL24 Antibody人β-微管蛋白(TUBB)

短波單胞菌屬植物血凝Anti-MRPL22 Antibody人β-微管蛋白(TUBB)

松口蘑小鼠解整合樣金屬蛋白9Anti-MRPL24 Antibody人前列腺F2α(PGF2α)

美梅奇酵母大鼠c-fosAnti-MRPL32 Antibody人前列腺F2α(PGF2α)

大腸埃希氏桿菌兔血管生成2Anti-MRPL35 Antibody人總前列腺特異抗原(tPSA)

構(gòu)巢曲霉植物生長激Anti-MRPL34 Antibody人總前列腺特異抗原(tPSA)

白地霉人肝結(jié)合性表皮生長因子Anti-MRPL39 Antibody人抗人類免疫缺陷病抗體(HIV)

阿舒假囊酵母植物凝脂Anti-MRPL40 Antibody人抗人類免疫缺陷病抗體(HIV)

雙孢蘑菇小鼠氧化型Anti-MRPL42 Antibody人解脲脲原體抗體(UU-Ab)

橄欖產(chǎn)色鏈霉菌大鼠c-jun Anti-MRPL42 Antibody人解脲脲原體抗體(UU-Ab)

環(huán)指蛋白146抗體亞側(cè)耳（元蘑）大鼠腹水癌細(xì)胞

RAS相關(guān)蛋白R(shí)ab5B抗體金針菇（黃）人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞

絲蛋白激1抗體蒜頭果白地霉人T淋巴瘤細(xì)胞

RAB3-GTP激活蛋白催化亞單位1抗體柿炭疽病人卵巢上皮細(xì)胞癌細(xì)胞
REV-ERBα/β激動(dòng)劑(SR9011)香菇(Cr62) 尿瓊脂（PH7.2）微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白大亞基

雪葉擬盤多毛孢新生霉（125ug/支）載脂蛋白B100

豬丹絲 N-BOC-O-芐基-L-絲固調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白

普通變形 N6培養(yǎng)基（不含瓊脂和蔗糖）微粒體三酰甘油轉(zhuǎn)移

馬沙門氏陽性血清 B5培養(yǎng)基（不含瓊脂和蔗糖）微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白

淺絳紅鏈霉 1/2B5培養(yǎng)基（不含瓊脂和蔗糖）脂肪合成

地衣芽孢桿改良MS培養(yǎng)基（不含瓊脂和蔗糖）彈性蛋白

雞傷門氏 MS培養(yǎng)基（不含瓊脂和蔗糖）CD44分子

拜氏不動(dòng)桿 CAYE培養(yǎng)基腦啡肽

韓國游動(dòng)微釷鋯試劑類風(fēng)濕因子

無花果曲霉 1-溴-2,4,6-三氟苯總膽紅

楊樹莖點(diǎn)霉接種測試微生物瓊脂培養(yǎng)基粘蛋白5AC

柯柯鹽湖枝芽孢桿種和底層瓊脂培養(yǎng)基生長釋放肽

根霉 MS培養(yǎng)基（含瓊脂，不含蔗糖）炭疽桿抗體

黃色鐮孢 1/4MS培養(yǎng)基（不含瓊脂和蔗糖）糖化血紅蛋白A1c
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)