當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 熱休克蛋白90抑制劑(Ganetespib)
貨號 | FS-X10375 |
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英文名稱:HSP90 Inhibitor
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號:FS-X10375
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:HSP90 Inhibitor 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg Ganetespib是一種*的熱休克蛋白90(HSP90)抑制劑,在OSA8細胞中,其IC50值為4nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:888216-25-9 別名:STA-9090 純度:99.56% 分子量:364.4 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
竹喙球菌性受體NK-p80抗體Human TGFβ3(Transforming Growth Factor Beta 3) 肌質(zhì)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣ATP(ATP2A1)
擬莖點霉粘附分子CD112抗體Human TGFβ2(Transforming Growth Factor Beta 2) 肌抑(MSTN)
乳桿菌屬腎小球粘附分子受體抗體Human Trx(Thioredoxin) 肌養(yǎng)蛋白(dystrophin)
黃色短桿菌成纖維核受體Nr5a2抗體Human TM(Thrombomodulin) 肌生成(MYOG)
大腸埃希菌鈉鈣交換蛋白1抗體Human RETN(Resistin) 肌激同工MM(CK-MM)
黑附球菌鈉鈣交換蛋白3抗體Human TGFBI/βIG-H3(Transforming growth factor-beta-induced protein ig-h3) 肌激同工MB(CK-MB)
棒桿菌屬天冬受體抗體Human TEK/Tie-2(Angiopoietin Receptor Tie2) 肌激同工BB(CK-BB)
球黑孢菌磷化核因子2相關(guān)因子2(Ser40)抗體Human REN(Renin) 肌激(CK)
長枝木霉Nemo樣激抗體Human IgM(Immunoglobulin M) 肌生成抑制(MSTN)
水生拉恩氏菌磷化Nemo樣激抗體Human TG(Thyroglobulin) 肌肉骨骼受體酪激抗體(MUSK Ab)
大腸埃希氏菌磷化NIFK抗體Human tTG(Tissue transglutaminase) 肌球蛋白重鏈(MHC)
阿爾通山堿線菌磷化NIFK抗體Human hCG-H(Hyperglycosylated Chorionic Gonadotropin) 肌球蛋白輕鏈激(MLCK)
克魯斯假絲酵母NCKAP5蛋白抗體Human PR-3(Proteinase-3) 肌球蛋白輕鏈(MLC)
阿魏側(cè)耳一氧化氮合轉(zhuǎn)運誘導(dǎo)抗體Human LTF(Lactoferrin) 肌球蛋白(MYS)
慢生根瘤菌中性鞘磷脂相關(guān)因子抗體Human FSH(Follicle-Stimulating Hormone) 肌強直蛋白蛋白激(DMPK)
鏈霉菌人白介3介導(dǎo)核因子抗體Human SPINK1/TATI(Pancreatic secretory trypsin inhibitor) 肌腱蛋白R(TN-R)
副氧化微桿菌Microbacterium│paraoxydans 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR丹皮
巨型艾美爾球蟲Eimeria│maxima 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR薄荷
蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,進口原裝虎杖
熱休克蛋白90抑制劑(Ganetespib)Prauserella L-3-(2-萘基)-血管生成2
蠟狀芽孢桿 碳銣血管生成受體酪激1
貝倫格葡萄座腔梨生?;?/span> 2,3-二甲吡啶血管生成受體酪激2
少根根霉 4,4'-雙(N-咔唑)-1,1'-聯(lián)苯血管生成樣蛋白2
欽海特德沃斯氏 雙[2-(2-苯并噻唑基)]鋅血管生成樣蛋白3
谷棒桿 2-羥基苯乙酮血管性血友病因子
包圍漆斑 3,3,5-三-L-甲狀腺原血管抑;血管穩(wěn)定蛋白
巨大球?qū)?/span> N-乙酰-DL-谷血紅蛋白
康氏假單胞 3-羥基-4-血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物
硬水黃桿 2-(2-氨基苯基)-1H-苯并咪唑血紅氧合1
不動桿 4-溴-4',4''-二甲基三苯血紅氧合2
動物雙歧桿乳亞種 7-羥基喹啉血
黃硬皮馬勃 3-羥基喹啉血漿α顆粒膜蛋白
豬布魯氏 6-羥基喹啉血漿前激肽釋放
固氮 寡霉A血鈉
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