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貨號 | FS-X10976 |
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產品介紹:
Pyridone6是一種泛JAK抑制劑,有效抑制JAK激酶家族,作用于JAK2,TYK2,JAK3和JAK1,IC50分別為1nM,1nM,5nM和15nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:457081-03-7 別名:CMP 6;JAK Inhibitor 純度:98.89% 分子量:309.34 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱:泛JAK抑制劑(Pyridone 6)
英文名稱:Pyridone 6
產品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10976
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
猴頭菌可逆型蛋白快速染色試劑盒Escherichia coli小鼠血小板活化因子(PAF)
臥孔菌DNA分子量標準參照片斷(bp):0 、200、300、400、500、600bpEscherichia coli小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α)
ATCC 145DNA分子量標準參照片斷(bp):0 、300、500、700、900、1200bpEscherichia coli小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α)
產短桿菌DNA分子量標準參照片斷(bp):200 、500、800、1200、2000、3000、4000bpEscherichia coli小鼠肌球蛋白(MYS)
云南尼阿巴菌DNA分子量標準參照片斷(bp):0 、200、300、400、500、600、700、800、900、00、1500bpEscherichia coli小鼠肌球蛋白(MYS)
銀耳DNA分子量標準參照片斷 (bp):200 、400、600、800、00、1500bpEscherichia coli小鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)
嗜芽孢桿菌質粒小提試劑盒Escherichia coli小鼠主要組織相容性復合體Ⅰ類(MHCⅠ/H-2Ⅰ)
木耳質粒小提試劑盒Escherichia coli小鼠GATA結合蛋白4(GATA4)
黃須腹菌膠上DNA回收試劑盒Escherichia coli小鼠GATA結合蛋白4(GATA4)
鏈霉菌 (燼灰類群)膠上DNA回收試劑盒Escherichia coli小鼠干擾誘導蛋白(IP-/CXCL)
孟氏假單胞菌DNA膠回收試劑盒Escherichia coli小鼠干擾誘導蛋白(IP-/CXCL)
淡紫擬青霉動物DNAout(動物DNA提取試劑盒)Escherichia coli小鼠上皮中性?;罨?8(ENA-78/CXCL5)
大腸埃希氏菌血液DNAout(血液DNA提取試劑盒)Escherichia coli小鼠上皮中性?;罨?8(ENA-78/CXCL5)
黑曲霉植物DNAout(植物DNA提取試劑盒)Escherichia coli小鼠抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)
日本曲霉病DNAout(病DNA快速提取液)Escherichia coli小鼠抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)
解幾丁質纖維單胞菌革蘭氏陰性細菌DNAout提取試劑盒Escherichia coli小鼠神經肽Y(NP-Y)
神經營養(yǎng)因子抗體美味牛肝菌小鼠骨髓纖維原細胞
谷受體2B抗體禾粘座孢霉(或禾漆斑菌)小鼠Th2型T淋巴細胞
核小體組裝蛋白1抗體白杯絲座孢人宮頸非典型鱗狀細胞
類固受體激活蛋白2抗體褐色小杈枝霉野生型人c-kit受體細胞株
泛JAK抑制劑(Pyridone 6)閃光口蘑 CalebassineP53蛋白
Nocardioides agariphilus 4-(p-Biphenylyl)-3-hydroxybutyric acidα淀粉
維羅納假單胞 Dipalmitin性蛋白
孟氏假單胞 木三糖
單核增生李斯特氏 Sideroxylin磷脂
尖孢鐮刀 Robinin堿性磷
大腸桿 Erythristemine堿性蛋白
黃直絲鏈霉 Reynosin霉
木賊鐮刀 Foliamenthoic acid磷烯式酮羧激
海洋桿 Picrasin B葡萄糖氧化
維也納原小單孢 Reneilmol次核糖基
干酪乳桿假植物亞種 桑皮酮H脂蛋白脂
抱川芽孢桿 Cannabigerol果糖-1,6-二磷酯
灰略紅鏈霉 Kobusone甘油-3-磷脫氫
木霉 石茸維生H
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