SMYD2抑制劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10708

中文名稱：SMYD2抑制劑

英文名稱：AZ505 ditrifluoroacetate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10708

產(chǎn)品介紹:

AZ505ditrifluoroacetate是一種有效的選擇性的SMYD2抑制劑，IC50為0.12μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1035227-44-1

別名：AZ 505 ditrifluoroacetate;AZ-505 ditrifluoroacetate

純度：99.50%

分子量：805.59

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

根霉腸道病71型/手足口病病抗原(C端)Anti-CLASP1 Antibody人紅激因子(ESF)

松口蘑植物擴張蛋白ATEXPA10（擬南芥）抗原Anti-CLASP1 Antibody人紅激因子(ESF)

芽孢桿菌埃茲蛋白（多肽）Anti-Claudin 7 Antibody人腫瘤壞死因子相關激活誘導因子(TRANCE)

彎曲芽孢桿菌鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白(N端多肽）Anti-CLASP1 Antibody人腫瘤壞死因子相關激活誘導因子(TRANCE)

大麗輪枝霉鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白(C端多肽）Anti-CLCC1 Antibody人生長激釋放因子(GH-RF)

蠟狀芽孢桿菌腦型脂肪結合蛋白抗原Anti-CLCF1 Antibody人生長激釋放因子(GH-RF)

淡黃青霉Fas死亡結構域相關蛋白抗原Anti-CLCN4 Antibody人巨噬趨化因子(MCF)

槐栓菌粘著斑激抗原Anti-CLCN6 Antibody人巨噬趨化因子(MCF)

枯草芽胞桿菌磷化粘著斑激抗原Anti-CLCN7 Antibody人α/β干擾受體(IFN-α/βR)

芽孢桿菌磷化粘著斑激抗原Anti-CLCN7 Antibody人α/β干擾受體(IFN-α/βR)

維多利亞維希尼克氏酵母Fas活化的絲/蘇激抗原Anti-CLCNKA Antibody人B生長因子(BCGF)

微小鏈霉菌原纖維蛋白1抗原Anti-CLDN19 Antibody人B生長因子(BCGF)

細小磚紅鐮孢菌纖維母生長因子4抗原Anti-CLDN1 Antibody人B分化因子(BCDF)

沼澤類芽孢桿菌纖維母生長因子5抗原Anti-CLDN10 Antibody人B分化因子(BCDF)

不動桿菌衰老關鍵蛋白抗原Anti-CLDN19 Antibody人上皮粘附分子(Ep-CAM/CD362)

黃曲霉FosB抗原Anti-CLDN2 Antibody人上皮粘附分子(Ep-CAM/CD362)

鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激磷抗體串珠鐮孢鼠神經(jīng)元細胞

原鈣粘蛋白11抗體玖紅穗狀霉小鼠肺鱗癌細胞

紅細胞磷脂酰肌聚糖A抗體亞麻刺盤孢人角膜內(nèi)皮細胞

細小清蛋白抗體休哈塔假絲酵母小鼠心肌成纖維細胞
SMYD2抑制劑黃曲霉 3,3-二甲基-1-雌受體

公州類諾卡氏甲基環(huán)氧烷雌誘導蛋白

黑倚囊霉 4-甲氧基苯乙促卵泡

硫磺木蠟促腎上皮質(zhì)釋放

蠟樣芽孢桿 6-(馬來酰亞基)己琥珀酰亞酯促腎上腺皮質(zhì)

林生毛霉四丁基磷二氫催乳

腐皮殼屬四丁基磷二氫蛋白多糖

無 5-溴間二甲苯多配體蛋白聚糖1

木霉屬 3-甲基-2--1-兒茶

薛瓦酵母 1,4-環(huán)己二兒茶抑

長枝木霉 4-乙酰氨基高遷移率族蛋白B1

玉乳桿安塞蜜睪酮

根瘤 3-甲基-2-吡啶過氧化

煉乳假絲酵母四羥甲基硫磷（THPS）核因子κB

大腸埃希 3-呋喃(含不定量的酐)環(huán)氧合2

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