Ro31-8220甲磺酸鹽是廣譜PKC抑制劑-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10711

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Ro31-8220甲磺酸鹽是廣譜PKC抑制劑

英文名稱：Ro 31-8220 mesylate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10711

產(chǎn)品介紹:

Ro31-8220(Bisindolylmaleimide IX)甲磺酸鹽是廣譜PKC抑制劑，對(duì)PKC-α，PKC-βI，PKC-βII，PKC-γ和PKC-ε的IC50分別為5nM，24nM，14nM，27nM和24nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：138489-18-6

別名：Ro 31-8220 methanesulfonate;Bisindolylmaleimide IX mesylate

純度：99.50%

分子量：553.65

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

動(dòng)性球菌磷脂?；鞍拙厶?/span>-3(多肽)Anti-CMTM3 Antibody人γ干擾誘導(dǎo)單核因子(MIGF/CXCL9)

假單胞菌磷脂?；鞍拙厶?/span>-4抗原Anti-CMTM5 Antibody人γ干擾誘導(dǎo)單核因子(MIGF/CXCL9)

淺黃鏈霉菌生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2抗原Anti-CMTM6 Antibody人干擾誘導(dǎo)T趨化因子(ITAC/CXCL11)

宇佐美曲霉顆粒B抗原Anti-CMTM6 Antibody人干擾誘導(dǎo)T趨化因子(ITAC/CXCL11)

高羊肚菌G蛋白偶聯(lián)受體14抗原Anti-CMTM8 Antibody人CD14分子(CDl4)

膨大彎頸霉G蛋白偶聯(lián)受體30抗原Anti-CNGA1 Antibody人CD14分子(CDl4)

秦氏蜜環(huán)菌促性腺激釋放激受體抗原Anti-CNGA1 Antibody人凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)

巨型艾美耳球蟲G蛋白偶聯(lián)受體54抗原Anti-CNGA1 Antibody人凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)

巨枝膝梗霉G蛋白偶合受體激2抗原Anti-CNGA2 Antibody人白共同抗原(LCA/CD45)

麥根腐平臍蠕孢促代謝型谷受體2抗原Anti-CNKSR1 Antibody人白共同抗原(LCA/CD45)

乳片球菌生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因α/黑瘤生激因子α 抗原Anti-CNGA2 Antibody人CD4分子(CD4)

中國(guó)臺(tái)灣根霉葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78抗原（熱休克蛋白70蛋白5）Anti-CNKSR1 Antibody人CD4分子(CD4)

靈芝還原抗原Anti-CNKSR2 Antibody人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)

彎孢菌A型人流感病H1N1-M2蛋白多肽Anti-CNKSR2 Antibody人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)

鹽水海桿狀菌A型豬流感病H1N1-M2蛋白Anti-CNN2 Antibody人角化生長(zhǎng)因子(KGF)

白地霉流感病A抗原Anti-CNOT4 Antibody人角化生長(zhǎng)因子(KGF)

蛋白體PSMα1抗體假結(jié)核耶爾森氏菌大鼠骨骼肌成肌細(xì)胞

蛋白體PSMα2抗體小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌人正常卵巢上皮細(xì)胞

蛋白體PSMα6抗體缺陷短波單胞菌類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞

蛋白體PSMα7抗體乳片球菌牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞
Ro31-8220甲磺酸鹽是廣譜PKC抑制劑Xenorhabdus 乙酰氧肟皮質(zhì)

黃曲霉二巰基馬來二鈉皮質(zhì)酮;腎上腺酮

草青霉八苯基環(huán)四硅氧烷前列環(huán)

膠孢 N-（3-溴基）鄰苯二甲酰亞前列腺E2

釀酒酵母 2,6-吡啶二甲二甲酯

假單胞 1-溴-5-戊烷去甲腎上腺

流散隱球酵母 2-甲酯全段甲狀旁腺

擬可可毛球二孢 α-溴肉桂固酮

杏鮑菇溴乙芐酯狀腺原

谷棒桿 3-甲基-2-甲三葉因子3

四川散斑殼 4,4-二甲氧基-2-丁酮神經(jīng)肽Y

嗜熱脂肪芽孢桿 4-氨基苯二甲神經(jīng)元烯化

熱帶假絲酵母 2-氨基-5-嘧啶腎

蠟葉曲霉代環(huán)己烷腎損傷分子1

酒色青霉 1,3-酮二羧生長(zhǎng)分化因子15
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)