小分子抑制劑(Sitravatinib)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10959

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：小分子抑制劑(Sitravatinib)

英文名稱：Sitravatinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10959

產(chǎn)品介紹:

Sitravatinib是一個新穎的小分子抑制劑，靶點是多個RTKs，IC50值是3980nmol/L。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1123837-84-2

別名：MGCD516;MG516

純度：98.64%

分子量：629.68

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

巨大芽孢桿菌人2,3Dinor血栓烷B2Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白三烯C4(LTC4)

球孢白僵菌人11去氫血栓烷B2Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠色C(Cyt-C)

小煤炱菌屬人血栓調(diào)節(jié)蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠色C(Cyt-C)

核果叢梗孢人纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠游離甲狀腺(FT4)

雙環(huán)林地蘑菇人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢaBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠游離甲狀腺(FT4)

海洋拉布倫茨氏菌人血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)

雅致放射毛霉人血漿α顆粒膜蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管緊張Ⅰ(Ang-Ⅰ)

松口蘑人末端補體復合物C5b-9Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠黑色抗體(MC Ab)

水棲黃桿菌人補體蛋白4Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠黑色抗體(MC Ab)

解污泥黃桿菌人補體蛋白3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀腺(T4)

地衣芽孢桿菌人ⅡBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀腺(T4)

長枝木霉人類白抗原B27Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)

土曲霉人結合珠蛋白/觸珠蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)

假單胞菌人血清總補體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠過敏/補體片斷4a(C4a)

加利福尼亞犁頭霉人過敏/補體片斷4Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠過敏/補體片斷4a(C4a)

甲基營養(yǎng)型芽胞桿菌人補體片斷5aBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠狀腺原(T3)

鋅指蛋白ZIC5抗體假單胞菌屬歐洲鰻鱺肝臟細胞

鋅指蛋白312抗體黃桿菌屬小鼠脾臟成纖維樣細胞

鋅指蛋白57抗體吡咯伯克霍爾德氏菌幼兔肺成纖維樣細胞

鋅指蛋白300抗體假真菌樣芽孢桿菌人皮膚毛細血管內(nèi)皮細胞
小分子抑制劑(Sitravatinib)曲霉疏展變種肉桂四環(huán)

短乳桿植凋亡激活因子

阪崎腸桿酵母浸出粉Fas相關死亡結構域蛋白

毀滅柱孢漆黃Bcl-2相關X蛋白

大腸埃希秦皮甲腫瘤壞死因子受體1

槐殼囊孢花旗松谷鹽

猴頭鬼臼心肌肌球蛋白重鏈

褐絲膜四丁基高D-乳

蠟狀芽孢桿 4,4'-聯(lián)苯二脂多糖；內(nèi)

巨大栓孔三號膽鹽一磷腺

康寧木霉對羥基二磷腺

冷湖黃桿梧桐膠氨酰tRNA合成

煙曲霉 2,2'-二硫二吡啶組氨酰tRNA合成

黑曲霉 4-(N-馬來酰亞基)環(huán)己烷-1-羧琥珀酰亞酯組氨酰tRNA合成

茄鏈格孢表兒茶粒巨噬集落激因子
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)