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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 泛Ras抑制劑(泛RAS-IN-1)
貨號(hào) | FS-X10952 |
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中文名稱:泛Ras抑制劑(泛RAS-IN-1)
英文名稱:泛RAS-IN-1
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10952
產(chǎn)品介紹:
泛RAS-IN-1是一種泛Ras抑制劑,破壞Ras蛋白及其作用子的相互作用。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1835283-94-7 純度:98.0% 分子量:717.65 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
腸沙門氏菌浩敦亞種人雄激結(jié)合蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠谷脫羧自身抗體(GAD-Ab)
黃色孢鏈霉菌人抗滋養(yǎng)膜抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠雌二受體(ER)
香菇(Cr62)人抗透明帶抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠雌二受體(ER)
雪葉擬盤多毛孢人抗卵巢抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠半乳糖6硫酯(Gal-6S)
豬丹絲菌人抗巨病抗體IgGBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠半乳糖6硫酯(Gal-6S)
普通變形菌人堿性胎兒蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)
馬沙門氏菌陽性血清人抗風(fēng)疹病IgM抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲狀旁腺激相關(guān)蛋白(PTHrP)
淺絳紅鏈霉菌人催產(chǎn)Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠(LPA)
地衣芽孢桿菌人相關(guān)血漿蛋白ABacillus subtilis subsp. subtilis小鼠(LPA)
雞傷門氏菌人抗內(nèi)膜抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)
拜氏不動(dòng)桿菌人抗抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)
韓國游動(dòng)微菌人皰疹抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)
無花果曲霉人胎盤生長(zhǎng)因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)
楊樹莖點(diǎn)霉人凝血Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)
柯柯鹽湖枝芽孢桿菌人ⅦBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)
根霉人可溶性白抗原GBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠apelin 12(AP12)
鋅指蛋白321B抗體云芝小鼠L細(xì)胞
內(nèi)臟異位相關(guān)蛋白/鋅指蛋白203抗體蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種山羊皮膚成纖維樣細(xì)胞
鋅指蛋白Zdhhc18抗體茯苓豬睪丸細(xì)胞
鋅指蛋白Zdhhc12抗體灰樹花人外周血B細(xì)胞
泛Ras抑制劑(泛RAS-IN-1)蘇云金芽胞桿幕蟲亞種 氟鈉CD59蛋白
溫特曲霉原變種 硫氫鈉甲基酮
季也蒙假絲酵母 鉍鈉芳香化
細(xì)鏈格孢 銻鈉酪蛋白激2
青枯假單胞* 鋁鈉核糖體S6蛋白激
產(chǎn)克雷伯氏 硫鈉視黃乙酰轉(zhuǎn)移
糾纏青霉 硫化鈉脂質(zhì)過氧化物
腸外致病性大腸桿 草鈉1,25-二羥基維生D3
灰腐質(zhì)霉 四苯鈉25羥基維生D3
禽腺病Ⅷ型 磷三鈉促性腺
越桔假絲酵母 無水磷氫二鈉纖維
馬齒莧叉梗孢 磷氫二鈉蛋白
釀酒酵母 無水磷二氫鈉乙酰酯
鳳尾菇、漏斗狀側(cè)耳(可訂購) 磷二氫鈉谷脫羧
黑曲霉 硫代硫鈉γ-氨基丁轉(zhuǎn)氨
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