PIK3C3和Vps34抑制劑(SAR405)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10379

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：PIK3C3和Vps34抑制劑(SAR405)

英文名稱：SAR405

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

貨號：FS-X10379

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：SAR405

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg

SAR405是一種PIK3C3/Vps34抑制劑，IC50為1.2nM。SAR405是自噬機制的近端抑制劑。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1523406-39-4

純度：98.48%

分子量：443.85

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

曲霉黑色瘤硫軟骨蛋白多糖抗體Human IL-24(Interleukin 24) 核因子κB抑制物激β(IKK-β)

大豆慢生根瘤菌突觸粘附分子3抗體Human IL-27(Interleukin-27 subunit alpha) 核因子κB抑制物激α(IKK-α)

木拉克德克斯酵母跨膜硫軟骨蛋白聚糖C抗體Human IL-28A(Interleukin-28A) 核因子κB受體活化劑配體(RANKL)

大腸埃希氏菌噬菌體神經(jīng)腫瘤Nova1抗原抗體Human IL-29(Interleukin 29) 核因子κB(NF-κB)

球孢白僵菌B淋巴鏈接激活蛋白抗體Human IL-3(Interleukin 3) 核糖體合成蛋白NSA2同源物(NSA2)

嘴突凸臍蠕孢中性鞘磷脂2抗體Human IL-31(Interleukin-31) 核糖體蛋白S9(RPS9)

球毛殼*核受體蛋白NR2E1抗體Human IL-4(Interleukin 4) 核糖體蛋白S25(RPS25)

金黃桿菌屬神經(jīng)外營養(yǎng)蛋白2抗體Human IL-33(Interleukin-33) 核糖核抑止劑(RNH1/PRI/RNH)

枯草芽孢桿菌腦特異性蛋白BPX抗體Human IL-5(Interleukin 5) 核糖核(RNASE1/RIB1/RNS1)

鈉線菌屬核纖層蛋白A識別因子抗體Human IL-6R alpha(Interleukin-6 receptor subunit alpha) 核糖核(RNASE)

萎蔫短小桿菌NOGO相互作用線粒體蛋白1抗體Human MDC(Macrophage Derived Chemokine) 核仁形成區(qū)嗜銀蛋白(Ag-NORs)

糙皮側耳神經(jīng)元X連鎖蛋白/兒童自閉癥相關蛋白抗體Human Mer/MERTK(Tyrosine-protein kinase Mer) 核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)

金龜子綠僵菌神經(jīng)元Y連鎖蛋白抗體（兒童自閉癥相關蛋白）Human KLK6(Kallikrein-6) 核基質蛋白22(NMP-22)

稍黃鏈霉菌神經(jīng)連接蛋白2抗體Human C-ERC(Mesothelin) 核基質蛋白22(NMP22)

戊糖乳桿菌NIPA樣蛋白3抗體Human PIM-1(Serine/Threonine-protein Kinase Pim-1) 核黃激(RFK)

枯草芽孢桿菌軸突生長誘導因子3抗體Human SERPINA4(Kallistatin) 和肽(copeptin)

團青霉Penicillium│commune 質量規(guī)格：>98%,BR綠原

黃曲霉Aspergillus│flavus 質量規(guī)格：>98%,BR秦皮乙

毛霉屬Mucor│sp. 質量規(guī)格：>98%,BR秦皮
PIK3C3和Vps34抑制劑(SAR405)抗生鏈霉 (R)-(+)-縮水甘油胰島樣生長因子2

生黃色鏈霉 (R)-(-)-,2-縮酮胰島樣生長因子結合蛋白-3

曲霉 3--5-三氟胰島原

鮑姆桑黃乙?；阴ヒ葝u自身抗體

平臍蠕孢無水肌胰淀

亮白曲霉 3-氨基-4-甲基戊胰高血糖

羅爾夫青霉醋己定胰高血糖樣肽1

扣囊復膜孢酵母 N-叔丁氧羰基-O-對甲苯磺?；z甲酯胰高血糖樣肽1受體

擬棒形節(jié)叢孢赤蘚紅B鈉鹽胰脂肪

柱隔孢 3-(基硅基)炔乙脫氫

克魯斯假絲酵母四氫對苯醌乙脫氫1

大腸埃希氏桿 2,5-二肼鹽鹽乙脫氫

樟疫霉 D-葡萄糖-6-磷乙脫氫2

克雷伯氏屬 4-雄烯-4--3,17-二酮乙酰CoA

枯草芽胞桿 S-2-氨基-1-苯乙乙酰CoA羧化
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)