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行業(yè)產(chǎn)品
當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> Akt廣譜抑制劑(GDC-0068)
貨號(hào) | FS-X10600 |
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產(chǎn)品介紹:
GDC-0068是一種選擇性的Akt廣譜抑制劑,作用于Akt1/Akt2/Akt3,IC50分別為5/18/8nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1001264-89-6 別名:Ipatasertib;RG7440 純度:98.0% 分子量:458.0 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:Akt廣譜抑制劑(GDC-0068)
英文名稱:GDC-0068
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10600
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
焦曲霉磺酰脲類藥物受體1抗體Anti-PTPRF Antibody棘皮動(dòng)物微管關(guān)聯(lián)蛋白樣蛋白2(EML2)
潘泰萊里亞島鹽單胞菌突觸泡蛋白2A抗體Anti-PTPRC Antibody(PB0115)激肽原1(KNG1)
膠孢突觸融合蛋白1抗體Anti-PXN Antibody激肽釋放原(PK)
寡養(yǎng)單胞菌磷化核突觸蛋白α抗體Anti-PYY Antibody激肽釋放結(jié)合蛋白(KAL)
其他質(zhì)粒磷化核突觸蛋白α抗體Anti-PYY Antibody激肽釋放9(KLK9)
橄欖產(chǎn)色鏈霉菌離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白SLC7A9抗體Anti-PYROXD1 Antibody激肽釋放8(KLK8)
蠟樣芽孢桿菌乙酰轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Anti-PTTG1 Antibody激肽釋放7(KLK7)
梭狀芽孢桿菌滑膜肉瘤X斷點(diǎn)蛋白5抗體Anti-PVRL1/NECTIN1 Antibody激肽釋放6(KLK6)
釀酒酵母腫瘤/抗原11.3抗體Anti-RAB10 Antibody激肽釋放5(KLK5)
茶樹(shù)菇外基質(zhì)底物反應(yīng)蛋白1抗體Anti-RAB11A Antibody激肽釋放4(KLK4)
青春雙歧桿菌唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集11抗體Anti-RAB11B Antibody激肽釋放3(KLK3)
布魯氏菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原Sema6A抗體Anti-RAB13 Antibody激肽釋放2(KLK2)
香菇S100A9抗體Anti-RAB14 Antibody激肽釋放15(KLK15)
哈茨木霉單羧轉(zhuǎn)運(yùn)蛋4抗體Anti-RAB18 Antibody激肽釋放14(KLK14)
假單胞菌*神經(jīng)降壓受體3抗體(糖蛋白95)Anti-RAB27A Antibody激肽釋放13(KLK13)
黑曲霉轉(zhuǎn)錄因子SOX10抗體Anti-RAB27A Antibody激肽釋放12(KLK12)
蛋白激C結(jié)合蛋白NELL1抗體巨孢鏈霉菌小鼠子宮成纖維細(xì)胞提取物
蛋白激C結(jié)合蛋白NELL2抗體利迪鏈霉菌小鼠卵巢上皮細(xì)胞提取物
腦特異性跨膜蛋白抗體鏈霉菌小鼠子宮平滑肌細(xì)胞提取物
環(huán)一螺旋蛋白1抗體TG1 Strain小鼠子宮頸上皮細(xì)胞提取物
Akt廣譜抑制劑(GDC-0068)枯草芽胞桿 1,4-二(基硅烷基)苯球蛋白A
人造沸石球蛋白G
乳桿屬 N,N-二甲基-N-(3-磺基)-1-十八烷內(nèi)鹽球蛋白M
淺綠黃假單胞 氧化鈦(IV)藍(lán)舌病
疣梗青霉 氧化鈦(IV)南非口蹄疫病1型
釀酒酵母 2-(三氟甲基)吡啶-3-甲南非口蹄疫病2型
鏈霉屬 線狀氧化銅南非口蹄疫病3型
馬腺疫鏈球獸疫亞種 硫化亞鐵表皮生長(zhǎng)因子
矩圓黑盤(pán)孢 四氧化三錳神經(jīng)生長(zhǎng)因子
釀酒酵母 鄰苯二甲單丁酯前列腺E2
海洋桿 叔丁基二茂鐵前列腺E1
蔥色串孢 (R)-(-)-4-芐基-3-酰-2-惡唑烷酮前列腺F2
釀酒酵母 Chloro[(R)-(+)-2,2'-bis(di-p-tolylphosphino)-1,1'-前列腺F1
單核增生科斯特氏 2-羥基吡啶-N-氧化物前列腺
柱狀田頭菇(茶樹(shù)菇、楊樹(shù)菇) 碲化鋅半乳糖凝集
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