JAK2抑制劑(TG-101348)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10602

產(chǎn)品介紹:

TG-101348是一種選擇性的JAK2抑制劑，IC50值為3nM；同時抑制BRD4，IC50值為340nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：936091-26-8

別名：Fedratinib;SAR 302503

純度：98.28%

分子量：524.68

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

中文名稱：JAK2抑制劑(TG-101348)

英文名稱：TG-101348

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10602

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

毛木耳兔抗雞IgM抗血清Anti-RAD51C Antibody基質(zhì)衍生因子2(SDF2)

枯草芽孢桿菌兔抗狗IgG抗血清Anti-Rad9b Antibody基質(zhì)衍生因子1(SDF1)

馬賽菌兔抗羊IgM抗血清Anti-RAG1 Antibody基質(zhì)抗原3(STAG3)

大腸埃希氏菌兔抗豚鼠IgG抗血清Anti-Rad9/Rad9a Antibody基質(zhì)抗原2(STAG2)

兔抗豚鼠IgM抗血清Anti-RAG2 Antibody基質(zhì)抗原1(STAG1)

釀酒酵母兔抗人IgG抗血清Anti-RAF1 Antibody基質(zhì)金屬蛋白9(MMP9)

塔賓曲霉兔抗人IgM抗血清Anti-RALA Antibody基質(zhì)金屬蛋白8(MMP8)

棒孢擬盤多毛孢兔抗猴IgG抗血清Anti-RALB Antibody基質(zhì)金屬蛋白7(MMP7)

癬囊腔菌兔抗猴IgM抗血清Anti-RALBP1 Antibody基質(zhì)金屬蛋白3(MMP3)

解淀粉芽孢桿菌兔抗小鼠IgG抗血清Anti-RALBP1 Antibody基質(zhì)金屬蛋白28(MMP28)

竹蓀D優(yōu)1號兔抗小鼠IgM抗血清Anti-RALBP1 Antibody基質(zhì)金屬蛋白27(MMP27)

副豬嗜血桿菌兔抗小鼠k-鏈抗血清Anti-RANBP1 Antibody基質(zhì)金屬蛋白26(MMP26)

農(nóng)研所溶桿菌兔抗小鼠IgG-Fc段抗血清Anti-RAPGEF2 Antibody基質(zhì)金屬蛋白24(MMP24)

胡椒枯萎病兔抗長爪沙鼠IgG抗血清Anti-RANBP2 Antibody基質(zhì)金屬蛋白23B(MMP23B)

分枝節(jié)桿菌驢抗人IgG抗血清Anti-RAP1A Antibody基質(zhì)金屬蛋白23A(MMP23A)

大腸埃希菌驢抗羊IgG抗血清Anti-RAN Antibody基質(zhì)金屬蛋白21(MMP21)

神經(jīng)細(xì)胞增殖和分化調(diào)控蛋白1抗體土脂環(huán)芽孢桿菌小鼠腎足突細(xì)胞提取物

NOTCH調(diào)節(jié)錨蛋白抗體索氏離蠕孢（小麥根腐病菌）小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物

神經(jīng)囊泡膜蛋白1抗體疣梗曲霉小鼠皮下脂肪細(xì)胞提取物

突觸生長相關(guān)蛋白抗體好食脈孢菌小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞提取物
JAK2抑制劑(TG-101348)天藍(lán)褐鏈霉三特丁基磷四氟鹽胰島樣生長因子2

釀酒酵母硝銣轉(zhuǎn)化生長因子β

Vibrio 正庚基溴化鎂γ干擾

假單孢氧化銦唾液

長根奧德菇（長根菇） 6,12-二溴屈成纖維生長因子

枯草芽孢桿二(1-金剛烷基)膦血管內(nèi)皮生長因子

蕈狀芽孢桿鄰苯二甲二酯氨基轉(zhuǎn)移

柯氏黑蛋巢 2,6-二氨基蒽醌天門冬氨基轉(zhuǎn)移

長孢被孢霉氫氧化鍶八水合物乳脫氫

石南棒桿氧化鍺谷氨酰轉(zhuǎn)肽

冷海水黃桿 3-(基硅基炔基)噻吩總膽紅

圈卷產(chǎn)色鏈霉 D-2-三氟直接膽紅

泡盛曲霉 2-氨基-3-溴-5-甲血氨

大腸埃希氏 N4-苯甲酰胞白蛋白

玫瑰核鏈霉 Fmoc-Val-OSu總蛋白

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