當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> MEK1和MEK2抑制劑
貨號 | FS-X10445 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
中文名稱:MEK1和MEK2抑制劑
英文名稱:Trametinib DMSO solvate
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10445
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:Trametinib DMSO solvate 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg Trametinib DMSO solvate是一種有效的MEK1/2抑制劑,特異性抑制MEK1/2,IC50約為2nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1187431-43-1 別名:GSK-1120212 DMSO solvate;Trametinib;JTP-74057;GSK1120212 純度:98.53% 分子量:693.53 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
凍土毛霉纖維蛋白溶原抗體Anti-CDC42 Antibody1,3-二磷甘油(1,3-DPG)
鞘盒菌DNA修復(fù)蛋白NBS1抗體Anti-CDC42 Antibody1,3-βD葡葡糖(1,3-βD-Glu)
宛氏擬青霉蛋白質(zhì)精甲基轉(zhuǎn)移1抗體Anti-CDC5L Antibody1,25二羥基維生D3(1,25(OH)2D3/DVD/DHVD3)
樺剝管孔菌色P450 1A2抗體Anti-CDC45 Antibody1,25二羥基維生D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)
砂單胞菌磷化磷酯Cγ1抗體Anti-CDC6 Antibody1,25二羥基維生D3(1,25 DHVD3)
耐寒短桿菌磷化磷酯Cγ1抗體Anti-CDCP1 Antibody組織蛋白B(CTSB)
粘紅酵母磷化磷酯Cγ1抗體Anti-CDC73 Antibody質(zhì)源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)
紅球菌磷化絲/蘇蛋白激Plk1抗體Anti-CDC6 Antibody脂氧合同工1(LOX-1)
白色短波單胞菌磷化多聚合激3磷化抗體Anti-CDC6 Antibody(PB0560)脂聯(lián)(human adiponectin)
梭菌突觸后密度蛋白93抗體Anti-CDH1 Antibody脂聯(lián)(Adiponectin/Acrp30)
燕麥鐮孢磷化突觸后密度蛋白93抗體Anti-CDH1 Antibody(PB0583)脂聯(lián)(Adiponectin,Acrp30)
短密青霉磷化突觸后密度蛋白95抗體Anti-CDH17 Antibody脂聯(lián)(Adiponectin)
雞樅(雞菌)磷化腫瘤抑制基因PTEN抗體Anti-CDH2 Antibody脂聯(lián)(Acrp30)
枯草芽孢桿菌磷化腫瘤抑制基因PTEN抗體Anti-CDH5 Antibody脂肪合成(FAS)
釀酒酵母樁蛋白Paxillin抗體Anti-CDH23 Antibody胰島樣生長因子結(jié)合蛋白7(IGFBP-7)
苛求芽孢桿菌磷化樁蛋白Paxillin抗體Anti-CDH5 Antibody胰島樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)
金黃殼囊孢Cytospora│chrysosperma (Pers.) Fr. 質(zhì)量規(guī)格:0.98
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
鐮孢屬菌種Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.98
MEK1和MEK2抑制劑產(chǎn)阿拉伯糖漢遜酵母 多球殼3氧代5α類固4脫氫2
釀酒酵母 2,8-雙(三氟甲基)-4-羥基喹啉類固5α還原1
大腸埃希氏 2-溴苯甲二乙縮肌激同工MB
戴爾根霉 4,5-二甲基噻唑鈣調(diào)神經(jīng)磷
豇豆慢生根瘤 5-甲基噻唑中性粒趨化因子1
復(fù)輪生小克銀漢霉 2-溴-4-氟吡啶內(nèi)皮特異性分子
馬鏈球馬亞種 4-叔丁基苯戊肝抗原b5
大腸埃希氏 N,N-二甲基間苯二,內(nèi)源性類洋地黃因子
變幻青霉 Fmoc-beta-促性腺平抑因子
腸桿屬 7--1H-吡咯[2,3-C]吡啶抗聚角蛋白微絲蛋白抗體
枯草芽孢桿 硝鐿絲聚合蛋白
鉤狀木霉 Pemetrexed disodium hydrate類風(fēng)濕因子抗體
假單胞 PCB No.30低糖基化IgA1
*櫻桃鏈格孢 PCB No.30半乳糖缺乏IgA1
紅硬囊果青霉 N-Z-L-Homoserine lactone球蛋白A1
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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