DT-diaphorase抑制劑(DMXAA)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10702

中文名稱：DT-diaphorase抑制劑(DMXAA)

英文名稱：Vadimezan

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10702

產(chǎn)品介紹:

DMXAA是一種競爭性DT-diaphorase抑制劑,Ki值為20μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：117570-53-3

別名：ASA-404

純度：99.19%

分子量：282.29

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

pOJ260環(huán)核陽離子通道蛋白α2抗原Anti-CDK5 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移15(NAT15)

藍微褐鏈霉菌C型鈉尿肽抗原Anti-CDK5RAP3 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移14(NAT14)

灰黃青霉睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子抗原Anti-CDK6 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移10(NAT10)

費氏中華根瘤菌5抗體Anti-CDK8 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移1(NAT1)

高山被孢霉抗Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)Anti-CDK9 AntibodyN-乙酰神經(jīng)酰合(NANS)

曲霉Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)Anti-CDKL1 AntibodyN-乙酰葡糖激(NAGK)

釀酒酵母IV型膠原(Collagen Ⅳ Ⅳ 型膠原)Anti-CDKL2 AntibodyN-乙酰硫酯(GAS)

聚生殼菌I型膠原蛋白Anti-CDKL4 AntibodyN-乙酰谷合(NAGS)

新城疫病Ⅴ型膠原(多肽)Anti-CDKL3 AntibodyN-乙酰β-D-基葡萄糖(NAGase)

細鏈格孢緊密連接蛋白1抗原Anti-CDKN1C AntibodyN-乙酰α-D-基葡萄糖(NAGLU)

pME6032少突膠質(zhì)跨膜蛋白抗原Anti-CDKN2B AntibodyN-?；阴；?NAAA)

死亡谷芽孢桿菌緊密連接蛋白1抗原(C端)Anti-CDKN1B AntibodyN-?；术Ｋ?(ASAH2)

異配囊接霉前列腺氧化環(huán)化1抗原Anti-CDKN2C AntibodyN-酰基鞘酰水解1(ASAH1)

嗜果刀孢肉堿棕櫚?；D(zhuǎn)移1A多肽抗原Anti-CDKN3 AntibodyN-肉豆蔻?；D(zhuǎn)移2(NMT2)

扣囊復膜孢酵母二氫嘧啶樣2CRMP2抗原Anti-CDX2 AntibodyN-肉豆蔻酰基轉(zhuǎn)移1(NMT1)

巨大芽孢桿菌降鈣受體樣蛋白抗原Anti-CDNF AntibodyN-去乙?；?磺基轉(zhuǎn)移4(NDST4)

含脯突觸相關(guān)蛋白相互作用蛋白1抗體地衣芽孢桿菌人甲狀腺乳頭狀癌細胞

外周蛋白2抗體嗜熱鏈球菌小鼠血管內(nèi)皮瘤細胞

轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體費氏志賀氏菌（福氏志賀氏菌)新生牛鼻甲細胞

PUM1蛋白抗體Hyphomonasadhaerens人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞,
DT-diaphorase抑制劑(DMXAA)蟲草屬鹽辛可寧腺病4型

鳥芽孢桿屬 2-氨基-5-溴吡尿

芽胞桿ATCC 9372；（曾用名：枯草芽胞桿黑色變種） 2,2,2-三乙酰β-內(nèi)啡肽

多變毛霉磷肌激

粉紅擲孢酵母甲氧基鹽鹽半胱蛋白1

黑曲霉十八烷過氧化4

尖鐮孢十八烷雌

氣單胞 2-十三烷酮肌

微紫青霉 2,6-二-4-氨基琥珀脫氫

南海桿狀異硫丁酯膜輔蛋白

嗜熱鏈球基膦酰基乙酯血紅

栓屬 2,4,6-基吡啶對甲苯磺鹽Q熱抗體

Winogradskyella eximia 3,5-二脫氧膽

植物乳桿 3-甲氧基苯甲腺病6型

枇杷鏈格孢 3-甲基環(huán)己酮腺病7型

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