PKCβ抑制劑(Enzastaurin)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10607

產(chǎn)品介紹:

Enzastaurin是一種有效的PKCβ抑制劑，IC50值為6nM；對(duì)其選擇性是對(duì)PKCα，PKCγ和PKCε的6-20倍。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：170364-57-5

別名：LY317615

純度：99.84%

分子量：515.61

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱(chēng)：PKCβ抑制劑(Enzastaurin)

英文名稱(chēng)：Enzastaurin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號(hào)：FS-X10607

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

疏棉狀嗜熱霉Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-ROCK2 Antibody肌球蛋白ⅦB(MYO7B)

櫛桿菌Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-ROR2 Antibody肌球蛋白ⅦA(MYO7A)

稻梨孢辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-ROR1 Antibody肌球蛋白Ⅵ(MYO6)

玫煙色棒束孢生物標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-ROR1 Antibody肌球蛋白ⅤC(MYO5C)

香菇屬膠體金標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RP2 Antibody肌球蛋白ⅤB(MYO5B)

海綿假單胞菌羅丹明標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPA1 Antibody肌球蛋白ⅤA(MYO5A)

水稻腸桿菌堿性磷（AP）標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPA32/RPA2 Antibody肌球蛋白ⅢB(MYO3B)

阿利坎特港富鹽菌FITC標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPL13A Antibody肌球蛋白ⅢA(MYO3A)

曲霉Cy3標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPGR Antibody肌球蛋白ⅠH(MYO1H)

ThermobifidaCy5標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPS27 Antibody(PB1134)肌球蛋白ⅠG(MYO1G)

耐賴(lài)芽孢桿菌Cy5.5標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPL19 Antibody肌球蛋白ⅠF(MYO1F)

釀酒酵母Cy7標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPS6 Antibody肌球蛋白ⅠE(MYO1E)

光滑青霉PE標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPS3 Antibody肌球蛋白ⅠD(MYO1D)

嗜熱鏈球菌PE-Cy3標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPS6KA1 Antibody肌球蛋白ⅠC(MYO1C)

pBV220PE-CY5標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPS6KA2 Antibody肌球蛋白ⅠB(MYO1B)

黃柄曲霉APC標(biāo)記的兔抗犬IgM抗體Anti-RPS6KA1 Antibody肌球蛋白ⅠA(MYO1A)

鼻咽癌相關(guān)蛋白6抗體綠螺球菌小鼠神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞提取物

神經(jīng)前體細(xì)胞發(fā)育下調(diào)蛋白4抗體棒桿菌屬小鼠牙乳頭細(xì)胞提取物

神經(jīng)元特異性蛋白家族成員2抗體克雷伯氏菌屬小鼠表皮黑色細(xì)胞提取物

核酪蛋白激和細(xì)胞周期蛋白依賴(lài)性激底物1抗體小牛肉葡萄球菌小鼠成年表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物
PKCβ抑制劑(Enzastaurin)蠟狀芽孢桿 (R)-1-[3,5-雙(三氟甲基)苯基]乙血小板衍生生長(zhǎng)因子受體α

松口蘑根赤殼血小板衍生生長(zhǎng)因子受體β

貝葉多孔 2-苯基-3-丁炔-2-肌酐

赤芝 (1R,2S)-1-苯基-2-(1-吡咯烷基)烷-1-半胱蛋白3

芽孢桿屬異甲基紫羅蘭酮70地塞松

交鏈孢屬 N-Boc-1,3-二氨基烷鹽鹽孕酮

膠孢 2-甲基-3-甲基-4-(2,2,2-三氟乙氧基)吡啶鹽鹽

勒仔樹(shù)根瘤 (+)-(8,8-Dichlorocamphorylsulfonyl) oxaziridineβ干擾

根癌土壤桿（可訂購(gòu)） 1,1'-二茂鐵二甲β-內(nèi)啡肽

藤黃微球二茂鐵乙炔γ干擾

燕麥鐮孢 Tergitol®壬基聚氧乙烯白介1β

產(chǎn)黃纖維單胞 Tergitol®壬基聚氧乙烯白介4

碳樣小單孢 Tergitol®壬基聚氧乙烯白介6

轉(zhuǎn)基因玉NK603質(zhì)粒分子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 雙乙鈉白介8

蘇云金芽孢桿 (+/-)-1-芐氧羰基-4-Boc-哌-2-羧甲酯球蛋白G

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