smoothened抑制劑(PF-04449913)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10832

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：smoothened抑制劑(PF-04449913)

英文名稱：PF-04449913

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10832

產(chǎn)品介紹:

PF-04449913是一種有效的smoothened抑制劑。PF-04449913結(jié)合到人SMO(181-787氨基酸位點)，IC50為4nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1095173-27-5

別名：Glasdegib

純度：99.31%

分子量：374.44

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

寡鞘單胞菌小鼠羥脯Anti-PBOV1 Antibody人花生四烯5脂加氧(ALOX-5)

Arthrobacter人神經(jīng)降壓Anti-PCDH11Y Antibody人花生四烯5脂加氧(ALOX-5)

普利茅斯大鼠解整合樣金屬蛋白8Anti-PDEA Antibody人5脂加氧(5-LO/LOX)

痢疾志賀氏菌大鼠抗Anti-PDE4C Antibody人5脂加氧(5-LO/LOX)

赭鱗蘑菇人神經(jīng)激肽BAnti-PDGFC Antibody人腺環(huán)化1(AC-1)

俄勒岡靈芝小鼠骨保護配體Anti-PDE4C Antibody人腺環(huán)化1(AC-1)

苜蓿中華根瘤菌大鼠胰島抗體Anti-PDGFD Antibody人可溶性腺環(huán)化(sAC)

扣囊復(fù)膜孢酵母小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白Anti-PDGFRA Antibody人可溶性腺環(huán)化(sAC)

小馬勃人強啡肽Anti-PDHA1 Antibody人鳥脫羧(ODC)

灰黃淺黃酵母小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgAAnti-PDIA4 Antibody人鳥脫羧(ODC)

貝氏葡萄座腔菌大鼠腎損傷分子1Anti-PDHA1 Antibody人蛋白酪激(PTK/CD115)

擬鷲峰假絲酵母人腦啡肽Anti-PDIK1L Antibody人蛋白酪激(PTK/CD115)

枯草芽孢桿菌大鼠抗單核抗體Anti-PDLIM1 Antibody人蛋白酪磷(PTP/PTPase/CD148)

紅色蠟?zāi)⑷?/span>γ肽Anti-PDP2 Antibody人蛋白酪磷(PTP/PTPase/CD148)

小鼠鐵蛋白Anti-PDK1 Antibody人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化(TACE)

食砜節(jié)桿菌小鼠碳酐2Anti-PDPK1 Antibody人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化(TACE)

RPS27A抗體栗疫菌大鼠膀胱成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基：

RHOG抗體矩圓黑盤孢大鼠海綿體內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基：

髓系細(xì)胞觸發(fā)受體1抗體樟疫霉人胃癌阿霉耐藥株

癌/睪丸抗原113抗體*被孢霉屬人腎囊腫襯里上皮細(xì)胞
smoothened抑制劑(PF-04449913)植物乳桿 3-苯乙酯抗鴨甲肝病A型3抗體

大腸埃希癸球蛋白M

秦氏蜜環(huán) 十四內(nèi)

白靈側(cè)耳 2-溴-4'-基苯乙酮D-乳脫氫

大腸埃希 6--1-己脂多糖

聚生殼 1-(2-乙基)鹽鹽雌受體

曲霉重鉻吡啶鎓圓環(huán)病抗體

耐輻射薄層乙鹽鹽圓環(huán)病

鏈霉屬 2，4-二巰基嘧啶ATP合成

瑞士乳桿 DL-氨酰-DL-亮三磷腺

暗棕色桿屬 1-（硅烷氧基）環(huán)戊烯Ca2+ATP

長柄大環(huán)柄菇 2-(甲硫基)-2-噻唑啉巴氏桿抗體

鞘氨單胞 2--4-氟黑色

細(xì)疣籃狀 2-氟-L-苯促卵泡

尖孢鐮孢苝孕酮
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)