AKT抑制劑(Deguelin)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10757

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

中文名稱：AKT抑制劑(Deguelin)

英文名稱：Deguelin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg

貨號：FS-X10757

產(chǎn)品介紹:

Deguelin是一種從魚藤屬植物中分離到的天然產(chǎn)物，是AKT的抑制劑。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：522-17-8

別名：(-)-Deguelin;(-)-cis-Deguelin

純度：98.0%

分子量：394.42

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

匍匐曲霉重組髓鞘少樹突膠質(zhì)糖蛋白1-125Anti-GRTP1 Antibody人抗腦組織抗體(ABAb)

Rhodobacter vinaykumarii雙微體2癌基因抗原Anti-GRM8 Antibody人抗腦組織抗體(ABAb)

大腸埃希氏桿菌偶聯(lián)雞卵白蛋白Anti-GSDME Antibody人抗麥膠蛋白/麥溶蛋白抗體(AGA)

污黑腐皮殼三聚與血藍蛋白偶聯(lián)物Anti-GSDMC Antibody人抗麥膠蛋白/麥溶蛋白抗體(AGA)

假單胞菌三聚與牛血清白蛋白偶聯(lián)物Anti-GSK3B Antibody人抗磷脂酰絲抗體(APSA)

小麥紋枯與牛血清白蛋白偶聯(lián)物Anti-GSPT1 Antibody人抗磷脂酰絲抗體(APSA)

熒光威克酵母髓鞘少樹突膠質(zhì)糖蛋白(活性多肽)Anti-GSTA1 Antibody人抗磷壁抗體(TA)

釀酒酵母冰/與牛血清蛋白偶聯(lián)物Anti-GTF2A1 Antibody人抗磷壁抗體(TA)

Shinella kummerowiae Lin et al.辣根過氧化物標記三聚Anti-GTF3C2 Antibody人抗淋巴抗體(ALA/LCA)

無色桿菌屬三聚偶聯(lián)雞卵白蛋白Anti-GTF3A Antibody人抗淋巴抗體(ALA/LCA)

產(chǎn)蝦青鞘鞍單胞菌三聚偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-GSTM2 Antibody人抗巨噬抗體(anti-macrophage Ab)

針猴頭三聚偶聯(lián)牛IgGAnti-GTF2H1 Antibody人抗巨噬抗體(anti-macrophage Ab)

庫爾勒海洋桿菌偶聯(lián)血藍蛋白Anti-GTPBP2 Antibody人抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)

外外安德倫茨氏菌三聚與雞卵白蛋白偶聯(lián)物Anti-GTF3C3 Antibody人抗甲狀腺過氧化物抗體(TPO-Ab)

巴西果小克銀漢霉神經(jīng)元特異性烯化抗原Anti-GTF3C2 Antibody人抗紅抗體(RBC)

指狀青霉Nogo-66 (1-40)Anti-GTPBP2 Antibody人抗紅抗體(RBC)

鈉離子肌轉(zhuǎn)運蛋白抗體木霉紅色熒光蛋白標記人結(jié)直腸腺癌細胞

神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK2抗體擬康氏木霉人肝內(nèi)膽管癌細胞系

神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK3抗體木木霉人大細胞肺癌細胞

神經(jīng)突觸相關(guān)蛋白SLITRK4抗體雅致枝霉黑人Burkitt淋巴瘤細胞
AKT抑制劑(Deguelin)尖孢鐮刀尿生化管（軍團）脂肪結(jié)合蛋白4

Oleispira antarctica 明膠液化生化管（軍團）β-羥基丁

土星漢遜酵母麥芽糖發(fā)酵管（軍團）非脂化脂肪

注水肉檢測試紙氧氣指示劑血管內(nèi)皮生長因子C

大腸埃希 2.5L圓底立式厭氧培養(yǎng)袋促卵泡抗體

赤霉胰化大豆蛋白瓊脂（TSA）促性腺抗體

相思根瘤 HB四連式牛津杯萊姆病

類干酪乳桿培養(yǎng)基C(EP標準)布魯氏桿病抗體

新疆黃桿培養(yǎng)基B（EP標準）蛋白激C

麥根腐平臍蠕孢 2-溴-5-甲氧苯(BMA)蛋白激A

綠僵志賀氏（BCT）增液誘導(dǎo)型NO合

擬青霉屬胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）（ISO9038-1-2000）Toll樣受體4

副豬嗜血桿胰蛋白胨膽鹽瓊脂（TBA）（ISO9038-1-2000）二

釀酒酵母 2-苯氧基苯總抗氧化能力

變灰尾孢胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）（新藥典）白介18
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)