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MLCK和TRPC6通道抑制劑

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 14:04:20瀏覽次數(shù):187次

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貨號 FS-X10758
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產品介紹:

ML-7hydrochloride是一種萘磺酰胺衍生物,有效抑制MLCK(IC50=300nM)和TRPC6通道(IC50>10μM)。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:110448-33-4

純度:98.18%

分子量:452.74

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

中文名稱:MLCK和TRPC6通道抑制劑

英文名稱:ML-7 hydrochloride

產品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號:FS-X10758

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

黃須腹菌神經肽 Y(1-36)Anti-GUCY1B1 Antibody人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)

黑附球菌神經保護肽Anti-GUCY1B2 Antibody人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)

雙孢蘑菇神經絲蛋白蛋白多肽Anti-GUSBP1 Antibody人抗核仁抗體(ANA)

瓊氏不動桿菌土霉偶聯(lián)牛血清白蛋白Anti-GZMB Antibody人抗核仁抗體(ANA)

多主葡萄殼菌土霉偶聯(lián)雞卵白蛋白Anti-GYPC Antibody人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)

根瘤菌雞卵白蛋白Anti-GUF1 Antibody人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)

豌豆根瘤菌抗腫瘤P53抗原Anti-GZMK Antibody人抗肝胞質1型抗體(LC1)

淀粉鏈霉菌撲克蒙蛋白Anti-H1-5 Antibody人抗肝胞質1型抗體(LC1)

褐色馬勃核糖體蛋白S6激1Anti-GZMH Antibody人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)

黃棕鏈霉菌蛋白AAnti-H1-0 Antibody人抗肺泡基底膜抗體(ABM-Ab)

Lasiodiplodia rubropurpureaP-糖蛋白抗原Anti-H1FOO Antibody人抗胸腺球蛋白(ATG)

束叢鏈霉菌磷化受體結合絲蘇激2Anti-H2AC11 Antibody人抗胸腺球蛋白(ATG)

深粘紅酵母萊克多巴與牛血清白蛋白偶聯(lián)物Anti-H1FOO Antibody人抗表皮基底膜抗體(EBMZ)

達格斯坦鏈霉菌萊克多巴與血藍蛋白偶聯(lián)物Anti-H2AFX Antibody人抗表皮基底膜抗體(EBMZ)

玉蕈(真姬菇)重組乙肝病表面抗原Anti-H2AC11 Antibody人抗中性粒/中心體抗體(ACA)

煙管菌Alexa Fluor 647標記兔IgG(流式同型對照)Anti-H2AC4 Antibody人抗中性粒/中心體抗體(ACA)

神經突觸相關蛋白SLITRK5抗體綠穗霉人神經母細胞瘤細胞

神經突觸相關蛋白SLITRK6抗體根霉屬的種人Burkkit淋巴瘤細胞

液泡蛋白分選受體SORCS2抗體三寶壟根霉人結直腸腺癌細胞

轉錄因子21抗體銀耳、白木耳人甲狀腺癌細胞HTh-7(干細胞庫保藏)
MLCK和TRPC6通道抑制劑雅氏艾美耳球蟲 雙歧桿BS培養(yǎng)基(不含瓊脂)纖維二糖

彎曲芽胞桿 動力培養(yǎng)基纖維木糖

球孢白僵 鄰苯二甲二異癸酯糖皮質

大腸埃希 TGY瓊脂甲狀旁腺

冬克青霉 RSMA培養(yǎng)基抗性磷

Sphingomonas oligoaromativorans 鄰單胞鑒別瓊脂Ⅰ型膠原C端肽

枯草芽孢桿 硫鹽還原專屬培養(yǎng)基(postgate培養(yǎng)基)I型前膠原氨基端肽

黑木耳 3,4'-二氨基二苯基副流感病

金針菇(F4-11) 凍干兔血漿脂肪合成

平菇 R3增殖培養(yǎng)基6-磷葡萄糖脫氫

皺褶假絲酵母 沙保羅氏瓊脂硬脂酰去飽和

苜蓿莖點霉 疊氮磷二苯酯(DPPA)酮脫氫激4

秀珍菇 厭氧產氣包口蹄疫病非結構蛋白3ABC

曲霉疏展變種 多粘B(4ug)骨化二

黃桿 硫新霉(100ug)骨化三

 


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