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貨號 | FS-X10836 |
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產品介紹:
Lonafarnib是一種有效的法尼基蛋白轉移酶(FPTase)抑制劑,作用于H-ras,K-ras和N-ras,IC50分別為1.9nM,5.2nM和2.8nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:193275-84-2 別名:Sch66336 純度:99.42% 分子量:638.82 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
英文名稱:Lonafarnib
產品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg
貨號:FS-X10836
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
細鏈格孢人P糖蛋白/滲透性糖蛋白Anti-Phospho AQP2 (Ser261) Antibody人肌球蛋白輕鏈激(MLCK)
葡萄座腔菌小鼠凝血抗凝血復合物Anti-Phospho ANAPC1 phospho S355 (S355) Antibody人肌球蛋白輕鏈激(MLCK)
傳染性喉氣管炎病人大腸癌專一抗原3Anti-Phospho AR (AR) (Ser94) Antibody人硫轉移pi基因(GSTpi)
美味側耳小鼠抗凝血受體Anti-Phospho ATF2 (Ser490,498) Antibody人硫轉移pi基因(GSTpi)
馬賽菌大鼠髓過氧化物Anti-Phospho ARHGAP35 (Tyr15) Antibody人S轉移(GSTs)
漢遜德巴利酵母漢遜變種大鼠顆粒BAnti-Phospho ARHGAP22 (S397) Antibody人S轉移(GSTs)
果生鏈核盤菌人大腸癌專一抗原2Anti-Phospho ATM (S1981) Antibody人泛分解(DUB)
球毛殼小鼠凝血受體Anti-Phospho ATF2 (Thr52) Antibody人泛分解(DUB)
小馬勃人大腸癌專一抗原4Anti-Phospho BECN1 (Ser234) Antibody人分泌型磷脂A2(sPLA2)
炭黑曲霉大鼠顆粒AAnti-Phospho BRAF (Thr599) Antibody人分泌型磷脂A2(sPLA2)
類干酪乳桿菌小鼠心肌肌鈣蛋白ⅠAnti-Phospho BECN1 (Ser295) Antibody人泛連接(E3/UBPL)
盤孢菌大鼠淋巴趨化因子Anti-Phospho ATRIP (Ser239) Antibody人泛連接(E3/UBPL)
屎腸球菌小鼠磷肌3激Anti-Phospho CAMK1 (Thr177) Antibody人肥大類(MCT)
奧氏蜜環(huán)菌人粘蛋白/粘液5BAnti-Phospho CCDC88A (Ser1417) Antibody人肥大類(MCT)
中慢生根瘤菌屬人腸三葉因子Anti-Phospho CCNC (Ser275) Antibody人多巴色異構(DT)
小鼠β內啡肽Anti-Phospho CD247 (Tyr142) Antibody人多巴色異構(DT)
gp130結合蛋白GAM抗體宓花豆根瘤菌牛乳腺上皮細胞
B淋巴細胞基因1抗體毛霉DMEM/F12*培養(yǎng)基:
轉化生長因子β1誘導轉錄因子1抗體蟬擬青霉HT-80*培養(yǎng)基:
跨膜蛋白16C抗體石榴小赤殼人骨巨細胞瘤細胞
FPTase抑制劑(Lonafarnib)Aurantimonas sp. (3-羧基)三苯基溴化膦病性肝炎
黑曲霉 2-芐環(huán)磷腺
福氏嗜冷桿 (4-羧丁基)三苯基溴化膦甲型肝炎病抗體
皺褶假絲酵母 甲氧甲?;交寤⒒钚匝醮?/span>
藤倉鐮孢 丁基三苯基溴化膦(TBP)Toll樣受體9
牛肝 3-氟-4-甲β-羥基丁
泰國葡糖桿 4-氨基環(huán)己甲游離脂肪
粘紅酵母 4,4'-二甲苯亞砜磷脂
靈芝 2-甲氧基噻乙型肝炎病E抗原
綠產色鏈霉 3-巰基-1-烷磺鈉乙型肝炎病E抗體
假單胞 甲脒亞磺主要組織相容性復合體Ⅱ類
根霉 2,2-二甲基-6,6,7,7,8,8,8-七氟-3,5-辛二酮主要組織相容性復合體Ⅰ類
溜曲霉 (-)2,2′-(3α,8α-二氫-8H-茚并[1,2--d]噁唑Toll樣受體3
桃色枝頂孢 烯基苯基Toll樣受體7
大腸埃希 2-溴甲基烯乙酯單核趨化蛋白1
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