PTEN抑制劑(SF1670)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10838

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：PTEN抑制劑(SF1670)

英文名稱：SF1670

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10838

產(chǎn)品介紹:

SF1670是一種有效的特異性的人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源蛋白(PTEN)抑制劑。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：345630-40-2

純度：98.0%

分子量：307.34

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

指狀青霉人胸腺白血病抗原Anti-Phospho DOK2 (Y299) Antibody人糖原合成激(GSK)

短雙歧桿菌大鼠牛小腸堿性磷Anti-Phospho E2F1 (S364) Antibody人糖原合成激(GSK)

金針菇小鼠促卵泡Anti-Phospho DOK2 (Tyr299) Antibody人胱天蛋白9(Casp-9)

Lysobacter daejeonensis小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽Anti-Phospho DUSP1 (Ser296/318) Antibody人胱天蛋白9(Casp-9)

拉雷斯戈麥斯氏隱球酵母人腫瘤特異性移植抗原Anti-Phospho EEF1A2 (Ser358) Antibody人胱天蛋白3(Casp-3)

大腸埃希氏菌大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白AAnti-Phospho EIF2AK3 (T981) Antibody人胱天蛋白3(Casp-3)

瓦爾肯葉菌小鼠脫氧吡啶/脫氧吡啶啉Anti-Phospho ELK1 (Ser383) Antibody彈性蛋白(NE)

中瀨畢赤酵母人足標(biāo)記蛋白/足盂蛋白Anti-Phospho EPB41 (Tyr660) Antibody彈性蛋白(NE)

杏鮑菇大鼠克拉拉蛋白Anti-Phospho ECT2 (T790) Antibody人碳酐2(CA-2)

秦氏蜜環(huán)菌大鼠腎上腺Anti-Phospho ELK3 (Ser357) Antibody人碳酐2(CA-2)

皺褶青霉人癌易感蛋白1Anti-Phospho EPS15 (Y849) Antibody人解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)

紅酵母屬*小鼠吡啶交聯(lián)物Anti-Phospho EPHB1 (Tyr594/604) Antibody人解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)

折疊馬賽菌小鼠骨橋Anti-Phospho ERBIN (Tyr14) Antibody人髓過氧化物(MPO)

竹喙球菌人T急性淋巴母白血病相關(guān)抗原Anti-Phospho FADD (S194) Antibody人髓過氧化物(MPO)

球孢白僵菌大鼠髓過氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體IgGAnti-Phospho FANCI (Ser556) Antibody人顆粒B(Gzms-B)

哈茨木霉大鼠補(bǔ)體蛋白3Anti-Phospho G3BP1 (S232) Antibody人顆粒B(Gzms-B)

瞬時受體電位離子通道蛋白/M亞家族抗體假根蘑菇小鼠乳腺癌細(xì)胞（熒光標(biāo)記）

腫瘤抑制轉(zhuǎn)移候選基因3抗體玫瑰擬層孔菌中國倉鼠卵巢細(xì)胞亞株

TRIM35蛋白抗體鮑姆針層孔菌人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞

p53靶蛋白3抗體氈被孔菌屬大鼠視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞
PTEN抑制劑(SF1670)局限青霉 BCYE-CYS瓊脂基礎(chǔ)前列腺E2

盤長孢狀盤孢 L-半胱鹽鹽白三烯

蘑菇可溶性焦磷鐵抗鴨甲肝病A型1抗體

皺褶青霉甘芐酯對甲苯磺鹽甲型肝炎Ⅲ型病抗體

褐平臍蠕孢硝鐵瓊脂胰蛋白

嗜幾丁質(zhì)芽孢桿 Stuart運(yùn)送培養(yǎng)基糜蛋白

魯?shù)劓溍?/span> D-核糖-雙岐桿鑒定淀粉

黃綠木霉基氫氧化硫溶液脂肪

根瘤 D-阿拉伯糖-雙岐桿鑒定球蛋白

巴氏醋桿 1/4MS培養(yǎng)基丁酰酯

大腸埃希氏 (S)-(-)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)核因子κB受體活化因子配基

鏈霉博檢革蘭氏陰性細(xì)鑒定系統(tǒng)甲狀旁腺

麥根腐平臍蠕孢 2,3-二苯硫降鈣

嗜熱雙歧桿好熱嗜亞種 3-噻吩卵黃抗體

球毛殼 EC-MUG培養(yǎng)基白介29
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)