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貨號 | FS-X10841 |
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中文名稱:CREB抑制劑(666-15)
英文名稱:666-15
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg
貨號:FS-X10841
產(chǎn)品介紹:
666-15是有效選擇性的CREB抑制劑,IC50值為81nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1433286-70-4 純度:98.65% 分子量:620.52 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
淡黃木層孔菌人非小肺癌抗原Anti-Phospho LIPE (Ser855) Antibody人磷脂A2(PL-A2)
地衣芽孢桿菌小鼠5羥色Anti-Phospho MAP3K11 (Ser674) Antibody人磷脂A2(PL-A2)
釀酒酵母小鼠P物質(zhì)受體Anti-Phospho MAP2K1 (Ser218,222) Antibody人一氧化氮合成(NOS)
繩狀孢子懸浮液大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測Anti-Phospho MAPK14 (Thr180,Tyr182) Antibody人一氧化氮合成(NOS)
釀酒酵母人肺癌標(biāo)志物DR-70Anti-Phospho MAP2K1 (Thr386) Antibody人端粒(TE)
曲霉小鼠P物質(zhì)Anti-Phospho MAPK1 (Thr202, Tyr204) Antibody人端粒(TE)
嗜鹽涅斯特連科氏菌人胚胎性硫糖蛋白抗原Anti-Phospho MAPKAPK2 (Thr334) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)
孔狀短小莖點霉大鼠ⅡAnti-Phospho MAPT (Ser416) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白5(MMP-5)
白地霉人本周蛋白Anti-Phospho MAPK9 (Thr183) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)
短小芽孢桿菌小鼠血管活性腸肽Anti-Phospho MDM2 (S185) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白4(MMP-4)
Rhizobium 大鼠內(nèi)Anti-Phospho MARK2 (T595) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)
發(fā)酵乳桿菌大鼠過氧化物體增殖因子活化受體γAnti-Phospho MEF2D (Ser444) Antibody人基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)
短芽孢桿菌小鼠甲狀腺過氧化物Anti-Phospho MST1R (Ser1394) Antibody人神經(jīng)特異性烯化(NSE)
異常漢遜酵母人癌胚鐵蛋白Anti-Phospho NCF4 (Thr154) Antibody人神經(jīng)特異性烯化(NSE)
細(xì)鏈格孢小鼠αL巖藻糖Anti-Phospho MYL12A (S19/S20) Antibody人肌激同工MB(CK-MB)
硬毛栓孔菌大鼠環(huán)孢AAnti-Phospho NCOA2 (Ser736) Antibody人肌激同工MB(CK-MB)
跨膜蛋白166抗體橘黃裸傘甘油菌
硫氧還蛋白結(jié)合蛋白2抗體蟬花1-1綿羊肺成纖維細(xì)胞
瞬時受體電位離子通道蛋白7抗體M亞家族蟬花人陰戶磷癌細(xì)胞
“冷"蛋白TRPM8抗體彩色豆馬勃4-1人外陰鱗癌細(xì)胞
CREB抑制劑(666-15)多主葡萄座腔 阪崎腸桿顯色培養(yǎng)基(DFI瓊脂)CD8分子
非食用色堿性橙Ⅱ(王金黃)對照液 酵母浸粉c-fos
可可里亞鎮(zhèn)鏈孢 K氏培養(yǎng)基C-反應(yīng)蛋白
果生鏈核盤 FB2添加劑C肽
淺黃色芽胞八疊球 (S)-(+)-扁桃D-乳
半裸法氏殼 MFC肉湯I(xiàn)I型膠原蛋白
腐皮鐮孢 MFC瓊脂I型膠原蛋白
魯氏接合酵母 葡萄球選擇性瓊脂Na-K-ATP
桃樹葉細(xì)性穿孔病* (1S,2S)-N,N'-雙[3-氧代-2-(2,4,6-三酰)亞丁基]-1,2-二苯基乙二P選擇
普通變形桿 亞硫鹽還原厭氧孢子液體培養(yǎng)基Toll樣受體2
多粘類芽孢桿 假單瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基/CN瓊脂Toll樣受體4
大杯蕈 金氏B培養(yǎng)基T亞群
頭孢霉 乙酰肉湯生化管α1性糖蛋白
微桿 1-溴芘α半乳糖基抗體
聚生殼 鈉氏試劑α干擾
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