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貨號 | FS-X11042 |
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英文名稱:Betulinic acid
產品規(guī)格:1mL(10mM)|25mg|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號:FS-X11042
產品介紹:
Betulinic acid能誘導腫瘤細胞凋亡,還可抑制HIV-1,EC50為1.4μ M。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:472-15-1 別名:Lupatic acid;Betulic acid 純度:98.58% 分子量:456.7 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
匍匐曲霉原變種Enterococcus sacchrolyticus大鼠甲狀旁腺激(PTH)
靈芝屬Enterococcus mundtii大鼠組(HIS)
葡萄座腔菌Enterococcus faecalis大鼠組(HIS)
委內瑞拉鏈霉菌Enterococcus durans大鼠白介13(IL-13)
土曲霉原變種Enterococcus hirae大鼠白介13(IL-13)
枯草芽孢桿菌Enterococcus solitarius大鼠白介15(IL-15)
土生空團菌*Enterococcus malodoratus大鼠白介15(IL-15)
大豆慢生根瘤菌Tetragenococcus halophilus大鼠白介16(IL-16)
Lysinibacillus sphaericus大鼠白介16(IL-16)
大腸桿菌Lysinibacillus sphaericus大鼠白介17(IL-17)
變化考克氏菌Bacillus cereus大鼠白介17(IL-17)
釀酒酵母Lysinibacillus sphaericus大鼠白介1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)
茄勞爾氏菌Bacillus pumilus大鼠白介1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)
pTRV 2Bacillus globisporus大鼠可溶性E選擇(sE-selectin)
魚蛉假絲酵母Bacillus licheniformis大鼠可溶性E選擇(sE-selectin)
湖北擬酵母Bacillus licheniformis大鼠白介1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)
視黃受體應答蛋白3抗體解糖熱纖維菌屬柱狀假絲酵母菌
視黃受體應答蛋白1抗體致黑脫硫腸狀菌錐毛殼屬
Rad52抗體地下熱袍菌Pannonibacter phragmitetus
抑癌基因Rbms3抗體萊廷格熱袍菌Paenibacillus dauci
HIV-1抑制劑(Betulinic acid)螺旋鏈霉 ent-16a,17,19-三羥基貝殼杉烷-18-羧
艾丁湖鹽漬芽孢桿 ent-16α17-二羥基貝殼杉烷-18-羧
大腸埃希 豨薟
平菇 ENT-16βH-貝殼杉烷-17,18-二羧
鴨疫里氏桿 細葉遠志B;遠志糖B
仙臺鏈霉 地黃苦
枯草芽孢桿 地黃C
弗雷德里克斯堡假單胞 G2
擬盤多毛孢 G1
釀酒酵母 B2
黑曲霉 B1
青島芽孢桿 新莪術二酮
枯草芽孢桿 白藜蘆-4'-甲
褐球固氮 桑黃酮G;桑根酮C
紅斑黃菇 甲基原纖細薯蕷皂
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