參數規(guī)格：
產品名稱：小腸結腸炎耶爾森氏菌（PCR-熒光探針法）
產品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產品貨號：FS-P10769
產品分類：熒光探針法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。
 AS3.2918培養(yǎng)基: 311模式菌株: no種屬: Penicillium│oxalicum提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法

植物乳桿菌培養(yǎng)基: 33模式菌株: no污泥提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法

 -1595℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

聚多曲霉生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no

 HBUM83884模式菌株: no安全等級: 1種屬: Streptomyces│sp.土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃

鼠種布魯氏菌培養(yǎng)基: 401作為生物學分型鑒定參考菌株提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: yes生長條件: 37 真空冷凍干燥法;

黑曲霉培養(yǎng)基: CM0013產檸檬。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 35℃ 礦物油法

 CICC6068培養(yǎng)基: 61,厭氧研究，。種屬: Bifidobacteriumlongum安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 37℃

曲霉屬培養(yǎng)基: CM0014抗癌活性提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C 真空冷凍干燥

 -1596℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

運動節(jié)桿菌培養(yǎng)基: 820模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

桔橙游動放線菌培養(yǎng)基: 0011模式菌株提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

短小芽孢桿菌培養(yǎng)基: 0081模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 33℃ -80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法；礦物油法

絳紅產色小單孢菌(紫紅產色小單孢菌,褐色小單孢菌)培養(yǎng)基: 0027代謝產物無抗菌或殺蟲活性。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法；礦物油法；定期移植法

暗孢節(jié)菱孢生長條件: 25培養(yǎng)基: 14枝桿提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 定期移植法

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077以淀粉為原料發(fā)酵制酒精。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

鹽平陽霉素p70 S6 Kinase/P70 Beta1  p70S6Kb抗原Thrombospondin 2  血小板反應蛋白2/凝血酶敏感蛋白2抗體

硫博萊霉素/博來霉素/爭光霉素PALB2(partner and locaizer of BRCA2)  乳腺癌易感基因相關蛋白2Thrombomodulin/CD141  血栓調節(jié)蛋白抗體

替佐米/保特佐米PAFR/PTAFR  血小板活化因子受體抗原thrombin II  凝血酶Ⅱ(凝血因子II)抗體

替佐米(標準品)Phospho-PAK4 (Ser99) peptide  磷化p21激活激酶4多肽抗原Thrap3/TRAP150  甲狀腺激素受體相關蛋白3抗體

博舒替尼PAK7/PAK5/MBT  激活激酶PAK7/PAK5抗原THRA1+2  甲狀腺激素受體α1+α2抗體

布地奈德PAR-1 (Protease-activated receptors-1)  蛋白酶激活受體-1抗原THRA1  甲狀腺激素受體α1抗體

布地奈德（標準品）PAR-2 (Protease-activated receptors-2)  蛋白酶激活受體-2抗原THOC2  轉錄因子THOC2抗體

亞葉鈣PAR4 (protease-activated receptor 4)  蛋白酶活化受體4/前列腺凋亡反應蛋白4抗原Thioster-containing protein 1  按蚊硫酯包含蛋白-1抗體

亞葉鈣（標準品）PARP(poly ADP-ribose polymerase)N-Terminus  多腺苷二磷多聚酶抗原(N端)Thioredoxin 2  線粒體硫氧還蛋白2抗體

喜樹堿PAX8(Paired box gene 8)  配對盒基因8抗原Thioredoxin  硫氧還蛋白抗體
小腸結腸炎耶爾森氏菌（PCR-熒光探針法）FluorometholoneAcetate　氟米龍醋酯　質量規(guī)格：>98%,BR

Pentabromophenylether　十二醚　質量規(guī)格：>98%,BR

3-Amino-3-azabicyclo[3.3.0]octanehydrochloride　氨基雜環(huán)鹽鹽　質量規(guī)格：>98%,BR

Kasugamycin　春雷霉素;春日霉素;克死霉　質量規(guī)格：>98%,BR

TulathromycinA　土拉霉素A，托拉菌素A,泰拉霉素　質量規(guī)格：>98%,BR

TulathromycinA　土拉霉素A(標準品)　質量規(guī)格：>98%,BR

Latamoxefsodium　拉氧頭孢鈉　質量規(guī)格：>98%,BR

Procyanidin　原花青素　質量規(guī)格：>98%,BR

Procyanidin　原花青素（標準品）　質量規(guī)格：>98%,BR

Piperine　胡椒　質量規(guī)格：>98%,BR

Piperine　胡椒(標準品)　質量規(guī)格：>98%,BR

PneumocandinB0　紐莫康定B0(肺囊康定)　質量規(guī)格：>98%,BR

Formoterol 　福莫特羅　質量規(guī)格：>98%,BR

HomatropineMethylBromide　甲后馬托品　質量規(guī)格：>98%,BR

AbirateroneAcetate　乙阿比特龍酯　質量規(guī)格：>98%,BR
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現Smear。