ULK1和ULK2抑制劑(MRT68921鹽酸鹽)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10844

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：ULK1和ULK2抑制劑(MRT68921鹽酸鹽)

英文名稱：MRT68921 hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10844

產(chǎn)品介紹:

MRT68921鹽酸鹽是有效的ULK1和ULK2抑制劑,抑制ULK1和ULK2,IC50分別為2.9nM和1.1nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

純度：99.71%

分子量：471.04

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

橙黃紅酵母大鼠膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白Anti-Phospho Ras-GRF1 (Ser916) Antibody人FMS樣酪激3配體(Flt-3L)

根霉小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成Anti-Phospho RPS6 (Ser244) Antibody人FMS樣酪激3配體(Flt-3L)

雅致放射毛霉大鼠血管緊張原Anti-Phospho RGS16 (Tyr168) Antibody人血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)

哈茨木霉小鼠組Anti-Phospho RRN3 (Ser649) Antibody人血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)

枯草芽孢桿菌枯草亞種人c-myc癌基因產(chǎn)物Anti-Phospho SH3BP2 (S427) Antibody人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)

熱帶假絲酵母人Smad1Anti-Phospho SLC12A5 (KCC2) (Ser940) Antibody人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)

大腸埃希氏菌大鼠熱休克蛋白60Anti-Phospho SHB (Tyr246) Antibody人Podocin

枯草芽孢桿菌小鼠脂蛋白相關(guān)磷脂A2Anti-Phospho SLC6A3 (DAT) (Thr53) Antibody人Podocin

肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種小鼠熱休克蛋白90Anti-Phospho SLC6A4 (Thr276) Antibody人蛋白(nephrin)

肉糜馬源性成分（定性）人Smad7Anti-Phospho SNCA (Ser129) Antibody人蛋白(nephrin)

中國漢納酵母乳變種大鼠二Anti-Phospho SNAP25 (Ser187) Antibody人α1微球蛋白(α1-MG)

枯草芽孢桿菌大鼠超氧化物歧化Anti-Phospho SMC1A (S966) Antibody人α1微球蛋白(α1-MG)

特異腐質(zhì)霉人腫瘤相關(guān)抗原Anti-Phospho SMAD3 (S423/S425) Antibody人尿微量白蛋白(ALB)

大腸埃希氏菌小鼠熱休克蛋白70Anti-Phospho SQSTM1 (Ser28) Antibody人尿微量白蛋白(ALB)

曲霉小鼠脂聯(lián)Anti-Phospho STXBP1 (Ser241) Antibody人抗腎上腺皮質(zhì)抗體(AAA)

Thielavia 大鼠熱休克蛋白糖蛋白96Anti-Phospho TAOK2 (Ser181) Antibody人抗腎上腺皮質(zhì)抗體(AAA)

前列腺癌抑癌蛋白3抗體山茶刺盤孢人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞

抑癌基因5抗體刺盤孢屬人食管腺癌細(xì)胞

腦腫瘤抑癌蛋白1抗體殼囊孢屬小鼠正常骨髓細(xì)胞

腫瘤蛋白p53誘導(dǎo)蛋白13腫瘤抑制基因桑樹枝枯病人盲腸腺癌細(xì)胞（未分化）
ULK1和ULK2抑制劑(MRT68921鹽酸鹽)小白菇(疊生) DRBC瓊脂補體蛋白3

焰耳 WORT瓊脂不對稱二甲基精

大豆慢生根瘤 WORT肉湯腸脂肪結(jié)合蛋白

大腸埃希氏 (S)-4-異基-2-惡唑烷酮超氧化物歧化

大腸埃希 YGC瓊脂成纖維生長因子2

白靈側(cè)耳改良綠色酵母和真肉湯傳染性胃腸炎病抗體

枯草芽孢桿 Littman瓊脂雌二

黃青霉 YM瓊脂雌

釀酒酵母 4-乙酰嗎啉促紅生成

產(chǎn)朊假絲酵母 YM11瓊脂促黃體

產(chǎn)氨短桿 OGY瓊脂促卵泡

黑曲霉 LM-137瓊脂促腎上皮質(zhì)釋放

解淀粉芽孢桿 MS培養(yǎng)基促腎上腺皮質(zhì)

黑曲霉乙酰乙叔丁酯促生長釋放

西藏假絲酵母 PPLO肉湯促性腺釋放
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)