GCDH葡萄糖脫氫酶檢測試劑盒微量法-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-01S63645

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產(chǎn)品名稱：GCDH葡萄糖脫氫酶檢測試劑盒微量法

規(guī)格：100管/96樣

檢測方法：微量法

貨號：FS-01S63645

商品介紹：

測定意義

GCDH（EC 1.1.1.47）催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，大量存在于高等動物的肝臟和弱氧化醋桿菌中。在低聚果糖中使用GCDH，不僅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量，而且生成的葡萄糖酸與鈣離子結(jié)合生成的葡萄糖酸是一種理

想的補鈣制劑。因而，GCDH已成為制備高含量低聚果糖的理想用酶。

測定原理：

GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，在340nm下測定NADH上升速率，即可反映GCDH活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進行檢測。

粗酶液提?。?/span>

1、細胞或組織樣品的制備：

培養(yǎng)細胞：先收集細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

試劑的組成和配制：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
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GCDH葡萄糖脫氫酶檢測試劑盒微量法異丁基鋰 1.6M 正己烷溶液2-基-3-甲基吡 95%Anti-Annexin I/FITC 熒光標(biāo)記人、大、小鼠膜粘連蛋白 I抗體IgG

（基硅烷）甲基化鋰 0.56 M in hexanes核黃-5′-磷鈉鹽水合物 73-79%(HPLC)Anti-Annexin II/FITC 熒光標(biāo)記膜粘連蛋白-2抗體IgG

基鋁 2.0 M 甲溶液核黃磷鈉 93%Anti-Annexin III /FITC 熒光標(biāo)記膜粘連蛋白 Ⅲ抗體IgG

3-溴甲 98%核黃磷鈉 USP級Anti-Annexin IV /FITC 熒光標(biāo)記膜粘連蛋白 Ⅳ抗體IgG

2,5-二溴甲 96%鹽去氧腎上腺 98%Anti-Annexin V/FITC 熒光標(biāo)記重組膜粘連蛋白-5(人)抗體IgG

對氟甲 98%醋氯己定 98%Anti-Annexin VI/FITC 熒光標(biāo)記膜粘連蛋白 VI抗體IgG

對氟甲 99%,升華純化鹽洗必泰 96%Anti-Anopheles stephensi protein 1/FITC 熒光標(biāo)記按蚊抗體IgG

3-氟甲 98%薯蕷皂分析標(biāo)準(zhǔn)品，>95%Anti-ANP/FITC 熒光標(biāo)記抗心鈉肽（心鈉）抗體IgG