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貨號 | FS-X10277 |
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中文名稱:CDK4/6抑制劑(LY2835219)
英文名稱:LY2835219
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg
貨號:FS-X10277
產(chǎn)品介紹:
英文名稱:LY2835219 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg LY2835219是具有選擇性的CDK4/6抑制劑,能夠抑制CDK4/CDK6的活性,IC50分別為2nM和10nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1231930-82-7 別名:ABEMACICLIB;CDK4/6 dual inhibitor 純度:99.87% 分子量:602.7 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
泡菜大洋芽胞桿菌白介3抗體Human RASIP1 腫瘤壞死因子α(TNF-α)
假單胞菌白介3受體a鏈抗體Human RASAL2 腫瘤壞死因子α(TNFα)
秀珍菇白介-5受體α鏈抗體IL-5RαHuman RASSF4 腫瘤關(guān)聯(lián)鈣信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子2(TACSTD2)
黑曲霉白介-10受體β抗體Human RBBP6 腫瘤蛋白p53(TP53)
氣微菌白介-12受體β1抗體Human RASEF 腫瘤標(biāo)志物(CA724)
枯草芽孢桿菌白介-12受體β2抗體Human RASGEF1A 中性內(nèi)肽/腦啡肽(NEP)
綠粘帚霉白介15受體α抗體Human RBBP8 中性粒趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)
*匍枝根霉白介17受體抗體Human RBBP9 中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)
黃玫瑰色諾卡氏菌白介-17B受體抗體Human RBM10 中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(Lipocalin-2/NGAL)
冷海水黃桿菌白介-18受體β鏈抗體Human RBM14 中性粒顆??贵w(ANGA)
洋蔥伯克霍爾德菌白介21抗體Human RASGRF1 中性粒抗體(ANA)
扶桑本森頓酵母白介21受體抗體Human RASGEF1B 中性粒堿性磷(NAP)
粗糙脈孢菌白介-22抗體Human RBM11 中性粒防御3(DEFA3)
解脂亞羅酵母白介29抗體Human RASIP1 中性粒防御1-3(HNP1-3)
草菇白介22受體結(jié)合蛋白抗體Human RASSF4 中性粒彈性蛋白(NE)
鹽水球形菌白介-1受體相關(guān)激4抗體Human RBM15 中心體紡錘體相關(guān)蛋白1(CSPP1)
尖鐮孢辣椒?;停ɡ苯房菸?/span>Fusarium│oxysporum 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)新橙皮二氫查爾
短芽孢桿菌Bacillus│pumilus 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)白當(dāng)歸腦
: DSM44739T=CGMCC4.3494T資源名稱: 青海擬諾卡氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)商陸皂
CDK4/6抑制劑(LY2835219)葡萄座腔 1-胡椒基哌尿
陰溝腸桿 2-甲基煙3-羥-3-甲戊二單酰還原
島生異擔(dān)子 4-叔丁基環(huán)己基乙酯多巴神經(jīng)遞質(zhì)
乳乳球 4-苯基苯甲26S蛋白體
香魚假單胞 5-溴-2,3-二氫-1H-茚-2-氫鹽α-防御5
博伊丁酵母 2-氟-4-甲氧基草膦乙酰轉(zhuǎn)移
拉曼被孢霉 2-吡草膦乙酰轉(zhuǎn)移
馬克斯克魯維酵母馬克斯變種 2,4-二三氟甲苯血管緊張
貝氏不動(dòng)桿 4-酮一水合物鹽鹽氨基端前心腦鈉肽
蛹蟲草 2,5-二三氟甲苯C-C趨化因子受體2
粉狀畢赤酵母 二甲基半胱氨鹽鹽亞精
爪哇根霉 氟化氫吡啶溶液核因子κB抑制蛋白β
假單胞 4-溴-2-苯核因子κB抑制物激α
變幻青霉 DL-對甲砜基苯絲乙酯FMS樣酪激3
蒙古鹽單胞 2-氨基噻吩-3-甲乙酯心肌錨定重復(fù)序列蛋白1
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